microRNA在肝癌异位癌栓中作用的研究

门静脉癌栓是影响肝癌病人预后的一个非常重要的因素，我们前期研究发现在肝癌病人中有一种癌栓和原发灶并不毗邻，和原发灶比有更强的转移能力和增值能力（我们定义为异位癌栓），具有非常重要的临床意义，但形成机制不明。本研究以异位癌栓为研究对象，以肝癌原发灶为对照，以前期microRNA芯片筛查的异常表达的miRNA为研究的切入点，运用实时定量PCR、免疫印迹、免疫沉淀、免疫组织化学、原位杂技组织化学技术等技术，利用大量的临床组织标本、体外培养的细胞和荷瘤小鼠模型为实验材料，深入探讨miRNA在肝癌异位癌栓发生中的作用和相应的机制，揭示肝癌门静脉癌栓发生过程中miRNA作用的调控机制；从miRNA角度找到在异位癌栓的发生诊断、设计治疗策略和制定预后判断标准方面具有临床意义的功能分子。

本项目主要探讨miRNA分子在肝癌门静脉癌栓发生、发展过程中的作用机制，从miRNA 角度找到在异位癌栓的发生诊断、设计治疗策略和制定预后判断标准方面具有临床意义的功能分子。按计划本项目如期开展并顺利完成，研究内容共发表三篇论文，分别发表在Journal of hepatology 、Gastroenterology和 Medical Hypothesis上。并在此工作基础上，申请国家自然科学青年基金一项。培养硕士研究生一名，博士研究生一名。. 通过本项目的研究，我们发现肝癌门静脉癌栓同肝癌原发灶具有不同的分子生物学特性。采用芯片技术我们发现癌栓具有独特的miRNA表达谱。在此基础上我们采用生物信息学手段结合分子生物学、细胞生物学技术，深入探讨了其中上调表达的miRNA分子——miR-135a的生物学功能。发现miR-135a在转录调控因子FOXM1的调控下，抑制迁移抑制因子MTSS1的表达，进而促进肿瘤细胞的转移。此外，结合临床资料分析，我们发现miR-135a的表达水平同患者的预后相关，能够在一定程度上反应患者的预后情况。这一部分研究结果发表在Journal of hepatology上。. 我们进一步研究发现, miR-135a能够调控Nanog的表达，Nanog又可以启动细胞黏附分子ICAM1的表达。我们深入研究揭示，表达ICAM1的肿瘤细胞（细胞系来源、肿瘤组织来源及循环肿瘤细胞）具有肿瘤干细胞特性：高表达干细胞特性相关基因、在悬浮培养体系中能够形成悬浮球、在小鼠体内能诱导生成肿瘤。此部分研究结果已发表在Gastroenterology上。这提示miR-135a可能通过维持肿瘤干细胞特性来促进肿瘤转移。在以上研究基础上，我们提出了“肿瘤干细胞漂变”的观点，发表在 Medical Hypothesis 上。. 根据以上研究， 我们提出了进一步的科学问题， 即mi-R135a 如何调控肿瘤干细胞的生物学特性， 这一课题申请到一项国家自然科学基金青年项目。