ROCK/MAP4在RhoC调控人滋养细胞迁移中的作用及机制研究

滋养细胞侵袭性迁移异常，是子痫前期等多种妇产科特殊疾病的明确病理因素。Rho亚家族蛋白是调节细胞微丝骨架调控细胞迁移的关键分子开关。课题组前期研究发现，RhoC的沉默导致细胞迁移下调的同时发生微管骨架解聚，而RhoC下游分子ROCK的活性抑制导致微管结合蛋白MAP4表达水平下调。因此我们推测：ROCK/MAP4调节微管骨架重构进而影响胞膜粘着斑结构解聚是RhoC调节滋养细胞迁移的重要机制。本项目拟在前期研究基础上，应用Western blot、RT-PCR、免疫沉降实验和免疫荧光激光共聚焦等实验方法，结合基因工程和RNAi的实验技术，来研究、分析ROCK/MAP4信号及其调节的微管骨架重构、粘着斑解聚在人滋养细胞迁移行为中的作用，并明确具体的ROCK亚型作用特点和MAP4精确磷酸化位点。进一步阐明滋养细胞的迁移的分子机制，为发展调控滋养细胞迁移的干预措施提供实验依据。

滋养细胞侵袭性迁移异常，是子痫前期等多种妇产科特殊疾病的明确病理因素。Rho 亚家族蛋白是调节细胞微丝骨架调控细胞迁移的关键分子开关。课题组前期研究发现，RhoC 的沉默导致细胞迁移下调的同时发生微管骨架解聚，而RhoC 下游分子ROCK 的活性抑制导致微管结合蛋白MAP4 表达水平下调。我们应用Western blot、RT-PCR、免疫沉降实验和免疫荧光激光共聚焦等实验方法，结合基因工程和RNAi 的实验技术，来研究、分析ROCK/MAP4 信号及其调节的微管骨架重构、粘着斑解聚在人滋养细胞迁移行为中的作用，并明确具体的ROCK 亚型作用特点和MAP4 精确磷酸化位点。我们发现在正常细胞培养的条件下，滋养细胞中RhoC蛋白表达水平升高可显著提高细胞的固有迁移、水平迁移、侵袭和增殖能力，而RhoC蛋白表达降低则可显著抑制细胞的固有迁移、水平迁移、侵袭和增殖的能力；但在低血清培养条件下，滋养细胞中RhoC的表达水平并不会对细胞增殖造成显著影响。同时在滋养细胞中，RhoC下游的靶分子ROCK I和ROCK II的蛋白表达水平与RhoC蛋白表达高度一致，提示RhoC在细胞内可能通过促进ROCK I和ROCK II分子的表达和作用而发挥生物学效应；而在滋养细胞中，MAP4蛋白的表达与ROCK I和ROCK II的变化高度一致，提示RhoC可能通过ROCK I和ROCK II对MAP4的磷酸化而实现对细胞迁移的调控。为进一步阐明滋养细胞的迁移的分子机制，为发展调控滋养细胞迁移的干预措施提供实验.依据。