NF－κB细胞信号传导通道：内源性抗炎因子Netrin-4调控角膜炎症的重要靶点

Netrin-4是目前发现唯一存在于角膜的神经突起导向因子, 参与角膜基底膜形成、角膜神经生长、新生血管及新生淋巴管形成，其在炎症领域的功能研究必将开辟一个崭新的医学研究方向。我们前期研究发现，Netrin-4可能作为内源性抗炎因子调控角膜炎症。我们拟研究Netrin-4及其受体在角膜表达及其来源，证明其在角膜炎症疾病中的意义；拟通过Netrin-4-shRNA重组质粒来调控Netrin-4基因表达，探讨沉默和过表达Netrin4基因的角膜致炎细胞生物学功能变化；通过炎症细胞模型及活体角膜炎症模型阐明Netrin-4作用的细胞类型、抗炎活性及分子机制，明确NF-κB及p53等细胞信号通路在其中发挥的作用;通过角膜Netrin-4基因剔降技术观察Netrin-4沉默对体内角膜炎症血管的影响。研究为角膜炎症发生的分子机制提供新的研究思路，为设计合理的多效药物及寻找有效的抗炎靶点提供了理论依据。

Netrins 是一种轴突和血管生成的相关分泌因子。然而，其在角膜脉管系统及炎症中的作用仍未知，现已发现Netrin-4和Netrin-1是抗血管生成因子。Netrin-4 是目前发现唯一存在于角膜的神经突起导向因子, 参与角膜基底膜形成、角膜神经生长、新生血管及新生淋巴管形成，其在炎症领域的功能研究必将开辟一个崭新的医学研究方向。前期我们已经发现了netrin-1的抗炎和抗新生血管作用，而在本研究中我们发现在抗新生血管形成上netrin-4与netrin-1有相似的作用。在本研究中，我们研究Netrin-4 及其受体在角膜表达及其来源，证明其在角膜炎症疾病中的意义；通过研究Netrin-4-shRNA 重组质粒来调控Netrin-4 基因表达，探讨沉默和过表达Netrin4 基因的角膜致炎细胞生物学功能变化；通过研究炎症细胞模型及活体角膜炎症模型阐明Netrin-4 作用的细胞类型、抗炎活性及分子机制，明确NF-κB 及p53等细胞信号通路在其中发挥的作用，同时，我们还进一步阐明了netrin家族成员中的netrin-4在体内外抗新生血管形成的机制。体外血管生成实验表明netrin-4可影响人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管腔形成、细胞生存、增殖、细胞凋亡及侵袭且呈剂量依赖性，分别于受伤当天及10天应用Netrin-4局部处理碱烧伤小鼠角膜，随后Netrin-4明显抑制并逆转角膜新生血管形成。Netrin-4抑制角膜上皮细胞核基质细胞凋亡、血管生成因子(VEGF)分泌，促进色素上皮衍生因子(PEDF)表达，减少NK-KB p65生成并抑制巨噬细胞及中性粒细胞聚集。角膜荧光染色显示使用外源性netrin -4小鼠碱烧伤眼逐渐好转，并且第7天碱烧伤诱导形成的角膜炎症痊愈( p<0.01)。netrin-4治疗组小鼠角膜内炎症因子如IL-1β、IL-6 、ICAM -1、 VCAM-1、 MCP -1 MIP-1含量明显减少( p<0.05)。另外，netrin-4显著降低碱烧伤小鼠角膜白细胞抗原CD45表达(p <0.001)。碱烧伤小鼠角膜局部使用netrin -4 可明显促进伤口愈合及减轻炎症反应，说明netrin -4可作为潜在的抗炎因子用于临床急性炎症反应。以上结果进一步揭示netrin-4运用于眼表或其他组织抗炎、抗新生血管形成的潜在药用价值。