基于中药复方类药有效组分特征图谱的质量控制方法与模式研究

本项目以抗痴呆经典方开心散为研究对象，基于前期系统化学成分研究，在对其进行抗痴呆药效作用研究的基础上，通过对复方样品、含药血清（病理模型下）、肠吸收样品（病理模型下）进行特征图谱研究，以及对复方-单味药特征图谱进行关联分析，建立开心散及其组方药味的类药有效组分特征图谱表征模式，阐明发挥药效作用的类药有效组分，建立复方类药有效组分筛选模式，并在此基础上，采用TLC或HPLC等方法建立科学合理的、全面体现开心散及其组方药味药效作用物质基础的质量控制方法。最终，建立一种基于类药有效组分特征图谱研究的中药复方质量控制方法与模式，为中药复方质量控制提供研究思路和方法学。

本项目主要包括三部分研究内容。.第一部分 开心散抗痴呆药效作用.一、开心散抗痴呆药效作用研究.分别采用跳台行为学实验和测定脑组织乙酰胆碱酯酶（AchE）活性实验的方法对开心散抗痴呆药效进行研究。.跳台行为学实验结果表明，在记忆获得阶段和记忆巩固阶段，选择7个时间点测试，开心散对模型大鼠的学习记忆能力有不同程度改善。大鼠大脑皮层乙酰胆碱酯酶（AchE）活性测定实验中，东莨菪碱模型组AchE 活力比正常对照组显著升高，在灌胃给予开心散水提物后，各时间点组均能够降低由东莨菪碱所引起的大鼠大脑皮层AchE 活力的升高。.第二部分 开心散特征图谱及类药有效组分研究.按照口服中药复方的吸收过程特点，分别对肠吸收液、含药血清中开心散化学成分进行特征图谱研究，并与提取物及单味中药特征图谱进行关联分析，筛选类药有效组分。.建立了开心散及各单味药的大鼠肠吸收液和大含药血清的HPLC，HPLC-MS特征图谱分析方法。采用所建立的方法测定了全方和单味药的特征图谱，并进行相关性研究，筛选出39个类药有效组分，其中29个为原型成分，10个为代谢产物；9个峰来源于人参，21个峰来源于远志，7个峰来源于石菖蒲，其余2个峰为远志和石菖蒲所共有；并且通过各特征峰的二级质谱及紫外光谱信息，并与对照品对照，指认了其中的27 个原型成分特征峰，其中来源于人参的9个：人参皂苷Re、人参皂苷Rf等；来源于远志的17个：西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、3,6'-二芥子酰基蔗糖等；来源于石菖蒲的1个为β-细辛醚。未指认出的2个原型成分特征峰。.第三部分 开心散质量控制方法研究.采用高效液相色谱法建立基于开心散主要抗痴呆类药有效成分西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖和β-细辛醚的开心散质量控制方法，对开心散水提物中主要类药有效成分含量进行测定。进行方法学考察，各项指标均合格。采用高效液相色谱法建立了基于开心散主要抗痴呆类药有效组分的各组成单味药质量控制方法，建立茯苓的薄层色谱鉴别方法和HPLC含量测定方法，建立了远志和石菖蒲的HPLC含量测定方法。为开心散及其组成单味中药质量控制提供科学依据.通过本项目的研究，建立了一种基于特征图谱类药组分筛选的中药复方质量控制方法，为开心散的进一步开发应用奠定基础，也为中药复方的科学合理的质量控制提供科学可行的研究思路。