CD59锚固蛋白的脂筏效应在T细胞活化信号转导中的作用研究

CD59是一种GPI锚固糖蛋白，其主要的功能是抑制补体攻膜复合物的装配而保护宿主细胞免受补体溶破，既往研究已证明CD59基因突变与血管增殖症及肿瘤逃逸有关，但CD59锚固蛋白的效应脂筏与T细胞信号转导的相关性研究国内外尚未见报道。本研究通过基因敲除、转基因及RNAi技术构建两种不同的CD59突变体：JM1（CD59沉默的Jurkat淋巴细胞瘤）和JM2（转CD59基因的Jurkat淋巴细胞瘤），用CD59的单克隆抗体或CD59的配体肽、C8、CD2与之相互作用，观测信号转导相关分子变化，探讨CD59的在体外T淋巴细胞信号转导中的作用。并通过动物模型，即提取CD59基因敲除或RNAi的小鼠T淋巴细胞，旨在探讨CD59GPI蛋白的脂筏效应在T细胞信号转导中的作用。该研究将为研究GPI锚固蛋白的信号转导机制提供依据，并为T细胞白血病、淋巴瘤的基因靶向治疗提供新思路。

经3年时间顺利完成计划任务书中的各项指标，发表论文50篇，8篇被SCI收录，获省科技进步三等奖、省医学科技进步奖一等奖、省教育厅自然科学一等奖各1项，培养博士、硕士15名。. CD59 GPI锚固糖蛋白作为脂筏中的重要成员，具有抑制补体攻膜复合体形成而保护宿主细胞免受补体溶破的功能。本课题组前期研究已证明CD59基因突变与糖尿病血管增殖症及肿瘤逃逸有关。但有关CD59锚固蛋白的脂筏效应在T细胞信号转导中的作用，国内外尚未见报道。. 本研究采用基因敲除、转基因及RNAi技术构建两种不同的CD59突变体：JM1（CD59沉默的Jurkat淋巴细胞）和JM2（转CD59基因的Jurkat淋巴细胞）。利用CD59单克隆抗体或CD59的配体肽-CD2交联，具有增强信号转导相关分子活性，促进T淋巴细胞信号转导的作用。将CD59与CD3、CD55、CD46相互作用，经信号转导关键分子如Fyn、Lck、PLCr、IP3、ZAP70钙离子等的定量检测，证明CD3、CD46、CD55穿膜蛋白均具有协助CD59GPI蛋白进行跨膜信号转导的作用。通过荷瘤小鼠动物模型，证明CD59基因敲除或RNAi的小鼠T淋巴细胞瘤增殖强度明显减弱，瘤体明显小于对照组。利用RNAi沉默CD59基因的正常人T细胞，证明在经抗原冲击的树突状细胞的刺激下， T细胞活化信号转导相关蛋白及T细胞对外来抗原的特异性免疫应答能力明显降低。由此证明CD59分子具有增强抗原特异性T细胞活化的作用。. CD59活化T细胞的机制与静息T细胞（resting T cells）活化早期胞内出现的信号事件非常相似：当CD59单抗交联T淋巴细胞表面的CD59分子后，引起T细胞内TCRζ、Cbl与众多蛋白激酶如Lck、Pyn、Hck、Syk、Shc、ZAP-70亚基的磷酸化，以及对PLC-γ、Gαi2的短暂募集与活化，胞内Ca2+浓度升高，导致T活化。尽管CD59分子不具跨膜段和胞内段，但可借助棕榈酸基团转位、CD46、CD55、CD3跨膜蛋白进行跨膜信号转导，从而促进抗原特异T细胞活化产生抗肿瘤免疫应答。该研究将为进一步探讨T细胞膜脂筏内可与CD59GPI分子结合的衔接分子和跨膜蛋白、以及彼此间相互作用的分子机制提供实验依据并为T系淋巴细胞白血病基因治疗提供新靶标，具有重要理论意义及临床应用价值。