IGF2基因组印迹介导结直肠癌的靶向治疗作用及其机制

胰岛素样生长因子2（IGF2）是最早发现有基因组印迹现象的基因之一，即正常细胞中只有来源于父本的等位基因表达而母源的不表达。而结直肠癌中普遍存在IGF2基因组印迹丢失（LOI）现象，即母源IGF2基因亦高表达，导致细胞的过度增殖和肿瘤的发生。本课题拟在已结题国家自然科学基金项目（30873022）的基础上，根据结直肠癌细胞中普遍存在IGF2 LOI和p53突变的现象，以复制缺陷型溶瘤腺病毒（H101）为载体，构建携带IGF2 印迹系统和杀肿瘤效应基因DTA的重组复制缺陷型溶瘤腺病毒，通过结直肠癌细胞中p53突变介导的溶瘤腺病毒的大量复制及IGF2 LOI介导的DTA表达，特异性地发挥双重靶向杀伤肿瘤细胞的作用，而正常细胞不受伤害，为结直肠癌的基因治疗开辟一条安全、高效的靶向基因治疗新途径，具有重要的理论意义和广泛的临床应用前景。

结直肠癌（Colorectal cancer，CRC）是临床常见的恶性肿瘤，据统计，每年全球CRC的新发病例达120万人，约有60 万人死亡，死亡率高居恶性肿瘤死亡率的第四位。本研究拟根据结直肠癌组织和细胞中普遍存在胰岛素样生长因子2（Insulin-like Growth Factor 2，IGF2 ）基因组印迹丢失（Loss of Imprinting，LOI）现象，设计针对IGF2 LOI的特异性肿瘤靶向治疗方法，在LOI肿瘤细胞中特异性地启动下游杀肿瘤效应基因的表达，从而杀伤IGF2 LOI的结直肠癌细胞。.本项目研究首先构建携带IGF2 Imprinting系统的重组复制缺陷型溶瘤腺病毒，流式细胞术及荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，验证携带IGF2 Imprinting系统重组复制缺陷型溶瘤腺病毒在各组细胞中的选择性表达功效；进一步构建携带IGF2 Imprinting系统及腺病毒复制基因E1A-E1B19KD的重组复制缺陷型溶瘤腺病毒，分别从细胞及动物水平检测重组溶瘤腺病毒对IGF2 LOI结直肠癌细胞靶向治疗功效。研究结果显示成功构建携带IGF2 Imprinting系统及腺病毒复制基因E1A-E1B19KD的重组复制缺陷型溶瘤腺病毒，细胞水平研究结果显示所构建重组腺病毒能显著抑制IGF2 LOI结直肠癌细胞的增殖，促进细胞凋亡，而对IGF2 MOI细胞无显著影响；建立HCT-8荷瘤裸鼠模型，瘤体内注射重组溶瘤腺病毒，结果显示重组腺病毒Ad315-E1A能够显著抑制裸鼠抑制移植瘤的生长，注射Ad315-E1A组的裸鼠生存期明显延长，结果提示重组腺病毒Ad315-E1A在HCT-8荷瘤鼠模型中可以有效的表达，从而诱导肿瘤细胞凋亡，本研究结果可为结直肠癌的基因靶向治疗提供新的思路。