“TGF-β-miR-224-HPV”的网络调控体系在HPV感染转归中的作用及机制研究

病毒相关肿瘤是病毒癌蛋白和宿主细胞内微环境的共同作用结果，病毒感染后宿主细胞的反应机制对病毒感染的转归起决定性作用，但迄今尚不知道是否存在直接或间接靶向HPV的宿主miRNA。本课题在我们以往研究取得一系列重要进展的基础上，拟从miRNA靶向病毒的独特视角，以HPV感染过程中miR-224和TGF-β的双向表达特征为切入点，探究TGF-β和miR-224在HPV产毒性感染阶段通过BRD4调控病毒复制和E2转录调控的作用及机制，阐释其在HPV流产性阶段感染通过EP400对E6/7表达的调控及效应，阐明解析HPV感染与致癌过程TGF-β和miR-224的双向反馈调控机制，并构建"TGF-β-miR-224-HPV"的网络调控体系，以明确决定HPV感染转归的关键分子机制。旨在探寻阻断HPV感染和宫颈癌发生的有效靶点，为实现宫颈癌药物预防提供科学证据，对病毒相关肿瘤药物的研发有示范意义。

在发展中国家，所有死于癌症的妇女中，宫颈癌仍然是最主要的原因之一。我们试图找到一个新的预测及治疗宫颈癌的靶点从而提高宫颈癌病人的预后。MicroRNA目前已被证实与肿瘤的发生和发展息息相关。在我们之前的研究中，我们通过基因芯片的方法筛选出了与宫颈癌发生发展相关的miRNA,其中我们挑选了miR-224作为我们的研究对象。我们通过Stem-loop RT-PCR法检测126例宫颈鳞癌组织和64例宫颈正常上皮组织的miR-224的表达水平，收集整理临床病理资料，分析miR-224的表达水平与宫颈癌临床不良预后因素的相关性。通过生物信息学方法，我们筛选出一批miR-224可能靶点，从中挑选出我们感兴趣的抑癌基因RASSF8。在宫颈癌细胞株Siha和CaSki中，利用细胞转染技术过表达miR-224以及siRNA干扰RASSF8的表达，利用MTT法检测细胞增殖能力，流式细胞技术检测细胞周期分布，划痕试验和Transwell侵袭试验检测细胞的迁移和侵袭能力，并利用Real time RT-PCR和Western Blot的方法检测宫颈癌组织中RASSF8的mRNA和蛋白水平，最后利用双荧光素酶报告基因的方法确认miR-224与RASSF8靶向关系。我们的研究表明miR-224通过靶向RASSF8促进了宫颈癌的进展。