清热滋肾固齿方治疗慢性牙周炎的效应分析及机理研究

牙周炎病变机制复杂，病程较长，不易彻底治愈并且易反复发作，而中药所含的化学成分或活性物质可通过多环节、多靶点方式发挥多种效应，且毒副作用小，特别适合牙周炎尤其是慢性牙周炎的药物治疗。我们前期对多味中药进行了hPDLCs/CMC筛选，并结合传统中医理论和临床经验，组成了"清热滋肾固齿方"；体内实验结果初步证实其具有抗牙周感染、促进牙周组织愈合的多向效应，但其效应基础和作用机制还有待进一步探讨。本课题拟利用hPDLCs/CMC-online-HPLC/MS系统及其他细胞与分子生物学检测方法，系统分析组方中各单味药的活性成分及效应机制；通过体内外的药效学和代谢组学研究，进一步考察清热滋肾固齿方的治疗作用，并在一定程度上阐明复方组方的配伍规律及疗效机制，为研制可用于治疗慢性牙周炎的"成分明确、机理清楚、量效相关、质量可控、疗效确切"的系列口服及外用的现代中药复方制剂奠定实验基础。

研究背景：牙周炎发病率很高，是目前成年人牙齿丧失的主要病因，对患者的生理和心理造成极大影响，研发出有效的药物用于临床牙周炎的治疗有重大意义。传统中草药因其活性物质可通过多环节、多靶点发挥多种效应，且毒副作用小，特别适于慢性牙周炎的治疗。本研究选择玄参、黄连、黄芩、骨碎补等组成“清热滋肾固齿方”用于牙周炎的治疗，对其药物活性成分进行筛选，并对其促进牙周组织愈合的临床效应和具体分子机制进行深入探讨。..研究内容：1、建立hPDLC/CMC-HPLC/MS在线联用系统，筛选中药和牙周膜细胞结合的活性部位和活性成分；2、对中药活性部位、活性成分的药效学进行考察；3、慢病毒感染端粒酶构建永生化牙周膜干细胞；4、建立牙周炎动物模型及选取临床病例，利用筛选药物复方制剂进行治疗，观察疗效；5、采用MAPKP PCR Array芯片、膜受体抑制剂与BER竞争结合实验等研究药物和细胞活性结合的膜表面靶标受体及信号通路。..研究结果：1、建立hPDLC/CMC-HPLC/MS在线联用系统，筛选得到中药黄连和黄芩的活性部位是黄连-水部位和黄芩-乙醇部位，活性成分为盐酸小檗碱和黄芩素、汉黄芩素；2、活性成分对细胞增殖、成骨等均有促进作用，和辛伐他汀都与hPDLC表面同一类膜受体发生特异性活性结合；3、外源性端粒酶成功感染入细胞并稳定表达，hTERT-PDLSC具有干细胞特性且表型正常无致瘤性，对药物的筛选能力更加稳定和良好；4、使用连补软膏和芩补软膏对牙周炎动物模型和临床病例进行药物辅助治疗，临床检查和炎症因子等指标均显示对牙周炎有良好疗效；5、芯片实验说明BER能引起胞内FOS和EGR1基因上调，各受体抑制剂和BER竞争试验说明可能作用膜靶标位点是EGFR，因此BER可能是通过“EGFR-MAPK-FOS”这条信号通路引起细胞生物学功能的变化。..意义：1、构建稳定的永生化牙周膜干细胞，解决细胞易衰老不稳定的缺点；2、成功建立hPDLC/CMC-HPLC/MS和hTERT-PDLSC/CMC-HPLC/MS在线联用系统，对多种中药进行快速、有效筛选，得到黄连、黄芩活性部位和活性成分，可促进细胞生长增殖和成骨；3、中药活性部位制备的复方软膏对牙周炎辅助治疗具有很好疗效；4、通过对BER亲和细胞膜表面靶点寻找，得到可能信号通路“EGFR-MAPK-FOS”，对深入研究药物作用机制提供了思路。