基于LXR-ABCA1途径泽泻汤调节HDLC的机制探讨

泽泻汤出自《金匮要略》篇，是治疗痰饮之要方。临床及现代药理研究表明泽泻汤具有利水、扩张血管、调脂等的作用，但其作用机制研究少见，尤其调脂的机制研究较罕见。本课题立足于前期临床观察结果（泽泻汤对HDLC的调节作用），以大鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，采用泽泻汤中药血清干预ox-LDLC负荷巨噬细胞，探讨该方中药血清对巨噬细胞内脂质分布影响，以及与LXR、ABCA1的关联性；在此基础上，进一步采用中药血清干预LXRE-luc荧光素表达质粒和ABCA1-EGFP质粒转染细胞，探索泽泻汤与LXR-ABCA1途径关联的内在分子机制，深入阐明泽泻汤调节HDLC的作用机制，进一步深化其调脂理论研究。

按照本课题的研究计划，我们如期完成研究任务。首先,我们成功建立了大鼠腹腔巨噬细胞的培养体系并制备出泽泻汤含药血清，并建立了ox-LDL（50mg/L）负荷的巨噬细胞泡沫化模型。然后经过MTS细胞活力检测试验筛选出20%泽泻汤血清浓度干预细胞，分为四组，空白组、ox-LDL组、ox-LDL+泽泻汤血清组、泽泻汤血清组。从而采用油红O染色和免疫荧光在形态学上观察到泽泻汤血清有抑制大鼠腹腔巨噬细胞脂质沉积的作用，而且分子学水平检测到泽泻汤血清通过上调LXRα促进ABCA1的表达，从而促进胆固醇逆转运，脂质外排。另外，我们也观察到泽泻汤血清可降低巨噬细胞源性泡沫细胞中MMP-9、IL-lβ的表达，从而抑制炎症因子在动脉硬化形成中的作用。LXRE-luc荧光素表达质粒转染293T细胞实验提示泽泻汤并不能直接识别LXRE激活LXR-ABCA1的表达，采用ABCA1-绿荧光表达质粒（ABCA1-EGFP）转染293T细胞，发现泽泻汤含药血清能够轻度增加ABCA1-绿荧光的表达，其机制可能是通过激活LXR从而增加ABCA1的表达或者通过延缓ABCA1蛋白的降解而起作用的。为进一步明确泽泻汤对LXRα的激活机制，我们超额进行构建3个不同长度包含ABCA1和LXRα启动子序列的DNA片段插入到PGL3-Promoter-luc荧光素酶质粒；目前已构建了ABCA1启动子-PGL3-luc荧光素酶表达质粒，正在测序验证该重组质粒的基因序列是否正确。而对于LXRα启动子-PGL3-luc荧光素酶表达质粒的构建，目前正在设计分段的不同酶切位点的引物，并且经过鉴定后的阳性克隆，送往公司测序.。对于上述的研究结果，目前已以论文的形式刊登2篇在《中国动脉硬化杂志》,另外一篇题目为“To observe the effect of Alisma Decoction on lipid metabolism and inflammatory response via activating LXRα pathway in macrophages-derived foam cells”文章已被“International Journal of Molecular Medicine”杂志（IF：1.9）接收。