基于线粒体能量代谢探讨中药泽泻健脾作用机制

泽泻是临床上常用中药，在《神农本草经》中列为上品，性寒味甘、淡，归肾、膀胱经。关于泽泻功效的描述古今差异较大，唐代以前典籍记载具有祛湿与补养的作用，宋代以后关于泽泻是否具有补益作用认识不一，现代药理研究表明泽泻具有利尿、降脂等作用，未见明确提出泽泻具有补益功效的论述，2010年版中国药典修订的功效为利水渗湿、泄热、化浊降脂。根据传统中医药理论、泽泻的性味归经与现代研究成果，本课题组提出中药泽泻对中医的脾具有补益的功效，即"健脾作用"的假说。为证明该假说，拟从线粒体能量代谢角度，从体内体外两方面进行验证，体外采用胃癌细胞进行试验，以膜电位、琥珀酸脱氢酶活性为评价指标，筛选有效部位，制备泽泻提取物，体内以大鼠为研究对象，制备脾虚模型，观察泽泻提取物对大鼠胃黏膜、骨骼肌线粒体结构、功能的影响，从整体-细胞-线粒体三个层次阐明其健脾作用机制。该研究结果将为泽泻的"养五脏、益气力"功效提供理论依据。

完成情况：.课题组按计划进行并完成本项目的研究。.首先，采集泽泻药材，进行了含量测定、红外指纹图谱等质量研究，发现不同大小泽泻的化学成分基本相同，其23-乙酰泽泻醇B含量符合中国药典规定；.接着，制备了泽泻提取物，并考察质量稳定性方面的指纹图谱的研究，发现不同批次泽泻提取物样品间的峰数、峰形及峰面积大小基本相同，相似度均在0.9以上，说明所制备的提取物质量稳定；.采用超临界CO2流体萃取结合高速逆流色谱法分离制备了23-乙酰泽泻醇B，该方法制备23-乙酰泽泻醇B简便、快速，所得产物的纯度高，适合于泽泻中23-乙酰泽泻醇B对照品的快速制备；.培养SGC-7901人胃癌细胞、进行了泽泻不同提取物及23-乙酰泽泻醇B对细胞线粒体能量代谢影响的比较研究，提取纯化线粒体、进行了线粒体膜电位、SDH指标的检测，发现泽泻醇提物对线粒体膜电位的损害较小，对SDH活性促进作用较显著，23-乙酰泽泻醇B在低剂量时能促进SGC-7901细胞增殖，中剂量与高剂量则对SGC-7901线粒体膜电位有一定的损伤而抑制增殖，但对SDH活性促进作用较显著，提示泽泻醇提取物与23-乙酰泽泻醇B具有较明显改善线粒体能量代谢的作用，为进一步体内探讨泽泻改善线粒体能量代谢研究奠定了基础；.以小承气汤为干预药物，采用破气耗气法，佐以饥饱失常，通过大鼠体重、粪便、毛色、精神、进食量等指标制备脾虚大鼠模型，同时通过脾虚大鼠骨骼肌线粒体ATP、膜电位进行模型评价，结果显示造模组大鼠骨骼肌线粒体ATP值和线粒体膜显著降低，造模组均明显低于空白对照组说明该脾虚造模方法可行，适用于泽泻对脾虚大鼠线粒体能量代谢影响的体内实验；.进行了泽泻对脾虚大鼠线粒体能量代谢影响的体内实验，分离了大鼠胃黏膜、骨骼肌，制备了供光镜、电镜检查的组织切片，提取纯化线粒体，进行线粒体结构观察与膜电位等线粒体功能指标的检测，结果表明，泽泻对脾虚大鼠骨骼肌组织及线粒体结构与功能具有较明显的改善作用，且呈剂量依赖性的趋势，但对胃粘膜线粒体功能没有明显影响，提示泽泻可能通过改善骨骼肌组织及其线粒体结构与功能起到健脾的作用，为进一步研究泽泻养五脏，益气力的作用机理提供理论基础和科学依据。.取得成果：.1)在国家级核心学术刊物公开发表论文5篇，省级期刊发表论文2篇；.2)培养了硕士研究生 2 名；.3)申请了1项线粒体相关的发明专利。