油菜花粉超微粉黄酮类成分药代动力学及指纹图谱研究

油菜花粉已被开发作为新型绿色饲料添加物，在畜牧业生产中具有广阔的应用前景。因花粉具有坚韧的细胞壁，影响营养成分的吸收利用，当前亟需研究花粉有效、低成本的破壁方法，解决其高效利用问题。本项目拟应用超微粉碎技术使油菜花粉破壁，以油菜花粉中活性代表成分黄酮类物质为检测指标，通过生物酶解和固相萃取技术建立血浆中黄酮类成分（槲皮素、山奈酚）样品前处理的方法，采用高效液相色谱法测定体内槲皮素和山奈酚的血药浓度，研究比较油菜花粉微粉、细粉中槲皮素和山奈酚在实验动物体内的药代动力学参数；建立油菜花粉超微粉黄酮类成分的HPLC指纹图谱。旨在揭示油菜花粉超微粉黄酮类成分在体内的吸收代谢规律及其生物利用度，明确最佳使用剂量；建立油菜花粉超微粉的质量控制标准，为油菜花粉超微粉在畜牧生产上的进一步开发利用提供科学理论依据。

油菜花粉作为新型绿色动物功能性添加物在畜牧业生产中具有广阔的应用前景。因花粉具有细胞壁，影响有效成分的吸收利用，本项目应用超微粉碎技术使油菜花粉破壁，旨在解决其高效利用问题。采用酶解和固相萃取技术建立了家兔血浆中黄酮类成分（槲皮素、山奈酚）样品前处理的方法，结果表明，血浆样品的最佳酶解条件为：葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶的终用量分别为400和20 U•mL -1 ，酶解时间为2h。 HPLC法测定了家兔灌胃给予油菜花粉超微粉和细粉后血浆中槲皮素和山奈酚的浓度，比较了油菜花粉超微粉和细粉中槲皮素和山奈酚在家兔体内的药代动力学参数。结果表明，油菜花粉超微粉和细粉中槲皮素和山奈酚的药代动力学最佳模型均为二室开放模型。油菜花粉超微粉槲皮素的主要药动学参数: AUC=0.3613µg•L-1•h，Tpeak =2.5714h，Cmax=0.01908µg•mL-1；油菜花粉细粉槲皮素的主要药动学参数: AUC=0.3411µg•L-1•h，Tpeak =3.048 h，Cmax =0.018769µg•mL-1。油菜花粉超微粉山奈酚的主要药动学参数: AUC=1.8897µg•L-1•h，Tpeak =3.6429h，Cmax=0.28079µg•mL-1；油菜花粉细粉山奈酚的主要药动学参数:，AUC=1.4599µg•L-1•h，Tpeak =3.7143 h，Cmax =0.24553 µg•mL-1。与细粉组比较，油菜花粉超微粉组血浆槲皮素和山奈酚的达峰时间缩短、达峰浓度提高，相对生物利用度较细粉分别提高了5.9%、29.44%。建立了油菜花粉超微粉黄酮类成分HPLC指纹图谱，其色谱条件为：色谱柱为Diamonsil C18柱 (250×4.6 mm,5 µm)，乙腈-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱，流速0.8 mL•min-1，检测波长254 nm，柱温25 ℃。在该条件下分析了10 个不同产地的油菜花粉超微粉样品，标定了10个共有峰。油菜花粉超微粉在AA肉鸡上的应用试验结果初步表明，在AA肉鸡日粮中添加油菜花粉超微粉能提高肉鸡的生长性能，增强机体的抗氧化能力，改善机体的免疫功能和内分泌功能等。上述研究结果揭示了油菜花粉超微粉黄酮类成分在体内的吸收代谢规律及其生物利用度，为油菜花粉超微粉的质量控制提供了切实可行的标准，为油菜花粉超微粉在家禽生产上的进一步开发利用提供数据借鉴。