利用单克隆抗体免疫分析法解析半夏泻心汤主成分的体内过程及其与配伍机理的相关性

复方配伍理论的实质是多种化学成分的协同作用或拮抗作用。多年来，我们从不同角度对半夏泻心汤进行了多水平、多指标的综合性的配伍意义的研究，但由于无法实现多种成分的同时检测，不能真正揭示方中药物拮抗或协同作用的实质。本研究将以半夏泻心汤为模板，人工合成半抗原黄芩苷、黄连素、人参皂苷、甘草酸四种主要有效成分的免疫原，通过免疫动物，阳性克隆筛选，细胞融合等建立单克隆杂交瘤细胞株，制备单克隆抗体，建立相应的免疫分析方法，可以分析半夏泻心汤中单个有效成分的体内过程，也可以实现多成分在单器官或组织中，或在多器官或组织样品的含量或存在的同步检测。不仅能够通过解析半夏泻心汤主成分的体内过程及其相互作用关系，进一步阐释其配伍机理的科学内涵，还解决了取材量较少的生物样品多成分分析检测的技术难点。因此，本课题不仅有助于解析半夏泻心汤药物配伍关系的实质，也为配伍理论的研究提供了新思路和新技术方法。

中药免疫分析技术的研究是本团队的主要研究方向。本课题人工合成了半夏泻心汤中半抗原黄芩苷、黄连素、人参皂苷Re\Rg1、甘草酸5种主要有效成分的免疫原，通过免疫动物，阳性克隆筛选，细胞融合等建立了单克隆杂交瘤细胞株，成功制备出5种单克隆抗体，并建立了相应的免疫分析方法。利用该技术方法，不仅分析了半夏泻心汤中的单个有效成分的体内过程，还实现了复方中多成分在单器官或组织中，或在多器官或组织样品的含量或存在的同步和连续多时点检测，进一步解析了半夏泻心汤主成分的体内过程及其相互作用关系。本课题建立的方法，解决了检测取材量较少的生物样品多成分分析的技术难点，奠定了下一步利用免疫组织化学和westblot等方法，研究复方成分在靶器官和组织，以及细胞和亚细胞定位的基础，为中药复杂组分体内过程、配伍机理、物质基础和作用靶点的研究提供了新思路和新方法。. 本课题已发表学术论文7篇，已录用1篇，待发表5篇；公开专利1项，新申请专利3项；提交研究生学位论文10部；获得北京中医药大学科技进步奖1项，教育部成果鉴定1项。建立的技术方法得到推广应用，已与美国弗吉尼亚理工大学人营养系签订合作研究协议，并以本课题研究结果为基础，新获得国家自然基金1项，省部级课题2项，企业合作课题1项。