肠道菌群失调在脾虚湿困型类风湿关节炎发病中的作用与机制研究

微生物感染是RA发病的重要原因之一，肠道菌群失调与RA发病密切相关。前期研究及文献报道均提示RA患者有不同程度的肠道菌群失调，但未能揭示是发病原因还是结果。中医脾虚与肠道菌群失调有紧密的联系，脾虚也是RA的基本病机之一，研究肠道菌群失调在脾虚湿困型RA发病中的作用及机制有重要意义。人源菌群相关性（HFA）动物模型是研究肠道菌群与疾病关系的理想模型，项目组在前期研究中已成功构建了健康人肠道菌群的HFA模型。本课题拟收集脾虚湿困型RA患者的粪便标本，利用选择性粪便细菌培养和PCR-DGGE两种方法检测其粪便菌群种类及含量，探讨脾虚湿困型RA患者的肠道菌群特点并制备相应的菌群标本，以HLA-DR4转基因C57无菌小鼠为研究对象，建立接种脾虚湿困型RA肠道菌群的转基因小鼠模型，并以胶原诱导关节炎（CIA）的转基因小鼠为阳性对照，探讨肠道菌群在脾虚湿困型RA发病中的作用及机制。

类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一种高致残率的自身免疫性疾病。前期研究及文献报道均提示RA患者有不同程度的肠道菌群失调，但未能揭示是发病原因还是结果。中医脾虚与肠道菌群失调有紧密的联系，脾虚也是RA的基本病机之一，本项目研究RA患者肠道中细菌数量和种类的研究，研究RA患者肠道梭菌对II型胶原诱导关节炎模型发病率、发病时间、发病程度的影响，探讨脾虚湿困型RA患者的肠道菌群特点并制备相应的菌群标本，以DBA1无菌小鼠为研究对象，建立接种脾虚湿困型RA肠道菌群的小鼠模型，为研究肠道细菌对类风湿关节炎疾病的影响提供科学证据。总体来说课题按计划书要求进行，按时间完成了绝大部分内容，并有一些新的发现，培养出了无菌小鼠。但是由于无菌小鼠具有低生育能力和高感染率，所以我们研究有所延后，但我们会继续我们已开创的工作。.实验研究发现类风湿关节炎与肠道菌群之间关系，通过活菌培养计数、荧光定量 PCR、变性梯度凝胶电泳分析脾虚湿困型RA患者肠道菌群、乳杆菌；接种条件致病菌梭菌，研究梭菌对构建关节炎模型的影响。健康受试者与脾虚湿困型RA患者肠道菌群结构有明显差异，RA患者肠道菌群中双歧杆菌和脆弱类杆菌数量明显少于健康受试者。早期RA患者肠道乳杆菌的数量增加，群落结构发生改变，唾液乳杆菌、惰性乳杆菌，瘤胃乳杆菌和黏膜乳杆菌高表达。接种早期RA患者肠道梭菌不能直接诱发关节炎，接种梭菌联合胶原诱导能显著增加小鼠外周血中细胞因子TNF-α、IL-1β水平。