呼吸道合胞病毒诱导上皮细胞基因激活/沉默的分子机制

用DD-PCR技术筛查RSV感染人肺SPC-A1细胞差异表达mRNA的ESTs，克隆、测序，Northern blot鉴定。在GenBank和dbEST中检索ESTs序列相似性，获得RSV诱导宿主细胞表达或沉默ESTs对应的基因，确定已知mRNA翻译产物及在RSV感染致细胞病变中的作用和功能。通过"电子延伸"无匹配序列ESTs，以生物信息学方法"克隆"未知mRNA全长序列，RT-PCR鉴定新基因。对激活表达的mRNA,根据iRNA原则设计转染质粒，以"基因沉默"技术对感染相关和"电子延伸"的新基因功能研究；对RSV感染诱导的"沉默基因"，比较其基因组与RSV基因组的序列，探讨RSV复制过程中形成的双链RNA与病变细胞"沉默基因"的相关性。研究RSV感染的SPC-A1细胞mRNA差异显示谱，揭示病毒感染与宿主细胞病变及机体病理的分子基础。