血塞通对脑梗死后不同恢复时点LINGO-1及其下游EGFR/PI3K /akt信号调控通路的调节作用

Found in the former country Natural Science Foundation funded research: in addition to Nogo-NgR and its downstream RhoA signal pathway, signal regulation pathway is also the existence of LINGO-1 and its downstream EGFR/PI3K /akt. The use of antibody blocking and specific antagonist, using HE and Golgi-Cox staining, Western Blot, RT-PCR and other methods, evaluation to observe the morphological structure, synaptic regeneration index, nerve function, signal transduction pathway and its downstream from the LINGO-1 EGFR/PI3K /akt's point of view, the expression level in whole, cell and gene, to observe the recovery of LINGO-1 after cerebral infarction in different time, EGFR, PI3K and Akt mRNA and protein expression level of neuron axon growth characteristics, and SYN P, the characteristic of SD-95 variation, the relationship between the three study to clarify, Xuesaitong whether can antagonize the LINGO-1 and its downstream EGFR/PI3K the role of /akt signaling pathway? Expression and inhibition of mRNA and protein of them? Or promote synapse regeneration ability role? Or improve the internal environment? And can promote axonal regeneration. This provides a new research method for this kind of research.

在前国自然课题资助研究中发现：除Nogo-NgR及其下游RhoA信号通路外，还存在LINGO-1及其下游EGFR/PI3K /akt的信号调控通路。采用抗体阻断和特异性拮抗剂，采用HE和Golgi-Cox染色、Western Blot、RT-PCR等方法，形态结构观察、突触再生指标、神经功能评价，从LINGO-1及其下游EGFR/PI3K /akt的信号调控通路的角度，在整体、细胞和基因表达水平，观察脑梗死后不同恢复时点LINGO-1、EGFR、PI3K和akt mRNA和蛋白表达水平、神经元轴突生长特点和SYN P、SD-95变化特点，阐明三者之间的相互关系，探讨血塞通是否能够拮抗LINGO-1及其下游EGFR/PI3K /akt信号通路的作用？而抑制它们的 mRNA和蛋白的表达？或是促进了突触再生能力的作用？或改善内环境?而能更好地促进神经元轴突的再生。为此类研究提供一种新的研究思路。

本项目是在前一个已结题的自然基金课题的发现基础上，采用抗体阻断和特异性拮抗剂（AG1478、LY294002），采用HE和Golgi-Cox染色、Western Blot、RT-PCR等方法，形态结构观察、突触再生指标、神经功能评价，从LINGO-1及其下游EGFR/PI3K /akt的信号调控通路的角度，在整体、细胞和基因表达水平，观察脑梗死后不同恢复时点LINGO-1、EGFR、PI3K和akt mRNA和蛋白表达水平、神经元轴突生长特点和SYN P、SD-95变化特点，阐明三者之间的相互关系，探讨血塞通是否能够拮抗LINGO-1及其下游EGFR/PI3K /akt信号通路的作用？而抑制它们的 mRNA和蛋白的表达？或是促进了突触再生能力的作用？或改善内环境?而能更好地促进神经元轴突的再生。结果发现：血塞通能明显的改善大鼠神经功能缺失症状，提高了梗死灶周围区PSD95、SYN和BDNF的表达量，改善了缺血性损伤后大脑皮层梗死周围区的神经元的结构和功能，改善了内环境，促进了神经突触的再生能力和突触的重塑，促进了大鼠损伤的神经功能的恢复，这种作用具有剂量依赖性；血塞通能明显的抑制Lingo-1的mRNA和蛋白的高表达，显著提高p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白比值，促进p-EGFR、p-PI3K、p-AKT的高表达。其作用机制：血塞通能提高梗死灶周围区PSD95、SYN和BDNF的表达量，抑制Lingo-1的过度表达，促进EGFR、PI3K、Akt的磷酸化表达，从而激活了EGFR/PI3K/Akt信号通路，产生良好的神经保护作用，而血塞通的这些作用具有多个靶点的作用。本研究为临床上使用血塞通治疗脑梗死提供了科学依据，并阐明了血塞通的部分作用机制，丰富中医的活血化瘀的理论，并为中药干预脑血管病的机理研究提供了一种新途径。