血塞通对脑梗死后不同恢复时点和部位Nogo-A受体NgR及其下游RhoA信号调控通路的调节作用

在已结题的自然基金课题的发现基础上，利用受体的特异性拮抗剂和体外给予Nogo-A技术，采用Golgi-Cox 染色、Western Blot、实时荧光定量PCR等方法，从Nogo-NgR及其下游RhoA的信号调控通路的角度，在整体、细胞和分子水平进一步阐明脑梗死后不同恢复时点和部位Nogo-A受体NgR1、NgR2、RhoA mRNA和蛋白的表达、神经元轴突树突生长特点、SYN P、SD-95和动物行为学的变化特点，及它们之间的相互关系；探讨血塞通是否能够产生拮抗Nogo-A、NgR1、NgR2、RhoA的作用，或是强化了突触再生方面的作用，或是改善内环境,而抑制Nogo-A、NgR1、NgR2、RhoA mRNA和蛋白的表达，而能更好地促进神经元轴突的再生；结合功能恢复情况，深入阐明血塞通对Nogo-NgR及其下游RhoA的信号调控通路的调节环节和作用机制，并研究提供一种新的研究思路。

本项目是在前一个已结题的自然基金课题的发现基础上，采用特异性拮抗剂技术、Western Blot、实时荧光定量PCR 、免疫组化等方法，从Nogo-NgR及其下游RhoA 的信号调控通路的角度，在整体、细胞和分子水平进一步阐明血塞通对脑梗死后不同恢复时点和部位Nogo-A、Nogo-A 受体NgR1、NgR2、RhoA 、RockⅡ mRNA 和蛋白的表达、SYP、SD-95 和动物行为学的变化特点，及它们之间的相互关系；并深入探讨血塞通对Nogo-NgR 及其下游RhoA 的信号调控通路的调节环节和作用机制。结果发现：血塞通和Y27632均有促进神经功能恢复的作用，并且二者对促进神经功能恢复可能有加和作用；血塞通具有抑制Nogo-A，NgR1，NgR2，RhoA，RockⅡ蛋白和mRNA表达的作用，这种抑制作用与Rock的特异性抑制剂Y27632类似，可认为血塞通可能通过抑制Nogo-A/NgR1及下游的Rho/RockⅡ信号通路上的关键分子的表达而发挥对缺血性脑梗死后神经元的重塑和保护作用；血塞通和Y27632的联合应用可使其对轴突再生和重塑的作用更加稳定；血塞通能降低大鼠局灶性脑脑梗死后血清炎症因子IL-1β 和TNF-α 的含量，IL-1β 和TNF-α 的表达与神经抑制因子Nogo-A 的受体NgR1 和下游通路RhoA 的表达具有相关性；血塞通通过对Nogo-A/NgR1及下游的Rho/RockⅡ信号通路的抑制作用，提高了梗死灶周围区SYP和PSD-95蛋白的免疫阳性物质的表达，改善了缺血性损伤后大脑皮层梗死周围区的神经元的结构和功能，激发了梗死后轴突的再生和突触的重塑。本研究为临床上使用血塞通治疗脑梗死提供了科学依据，并为中药干预脑血管病的机理研究提供了一种新途径。