益肾化浊法调控慢性脑缺血血管性痴呆大鼠缺氧信号转导通路的研究

A VD model in rats with chronic cerebral ischemia by permanent ligation on bilateral common carotid arteries is to be performed in the research. The changes in expressions of HIF-1 alpha and its targeting gene EPO, VEGF/VEGFR2, GLUT-1 in cortex and hippocampus of rats at 1,3,6,8 weeks are to be detected in combination with pathology, learning and memory ability. The changing tendency of hypoxic signaling transduction pathway in the formation of VD is to be observed dynamically and the mechanisms in it are to be discussed. Furthermore, the potential mechanism underlying chronic cerebral ischemia involved in the development of dementia is to be uncovered in order to supply a new method for the treatment of VD. Additionally, changes in pathology, learning and memory ability, the hypoxia signaling transduction pathway HIF-1alpha as well as its targeting gene EPO, EPO, VEGF/VEGFR2, GLUT-1 of rats with VD treated by Yi Shen Hua Zhuo therapy (Cong Sheng Capsules) are to be observed. The mechanism underlying Yi Shen Hua Zhuo therapy regulating hypoxia signaling transduction pathway when treating VD are to be discussed at global, cellular, molecular levels together with the discussion on the effective mechanisms in TCM treating VD.

本研究采用双侧颈总动脉永久结扎法（2-VO）制备慢性脑缺血VD大鼠模型，检测1、3、6、8周大鼠皮层、海马中HIF-1α及其靶基因-EPO、VEGF/VEGFR2、GLUT-1的表达变化，与病理形态学、学习记忆能力相结合，动态观察缺氧信号转导通路在VD形成过程中的变化趋势，探讨缺氧信号转导通路在VD形成过程中的作用机理，进一步探讨慢性脑缺血在痴呆发生过程中的可能机制，为治疗VD提供一个新的途径；观察益肾化浊法（聪圣胶囊）治疗VD大鼠学习记忆能力、病理形态学和缺氧信号转导通路HIF-1α及其靶基因- EPO、VEGF/VEGFR2、GLUT-1的变化，从整体、细胞、分子水平探讨益肾化浊法在治疗VD时对缺氧信号转导通路的调节机制，探讨中医药治疗VD的效应机制。

慢性脑缺血所致的一系列的病理生理和生化方面的改变与人类血管性认知功能障碍改变相近，是发展成为 VD的主要危险因素。本课题采用双侧颈总动脉永久性阻断法(2-VO) 制备慢性脑缺血VD大鼠模型，观察造模后1周、3周、6周、8周大鼠学习记忆能力（Morris水迷宫）、脑组织病理形态学、缺氧信号转导通路HIF-1α及其靶基因-EPO、VEGF/VEGFR2、GLUT-1的动态变化（免疫荧光染色法、Western blotting 法、real time-PCR法），探讨缺氧信号转导通路在慢性脑缺血导致痴呆的发病过程中作用机制，为治疗痴呆提供新的防治途径，并探讨益肾化浊法治疗VD的效应机制。.研究发现（1）大鼠双侧颈总动脉永久性结扎可成功制备慢性脑缺血痴呆的动物模型，在造模后1周开始出现进行性学习记忆能力下降，6周时达到高峰，8周时开始减轻。（2）慢性脑缺血可使大鼠脑组织神经元变性、坏死及脱失，锥体细胞层结构不完整，胶质细胞增多，且随着缺血时间的延长，损伤程度逐渐加重，在造模后6周损伤最为严重。（3）慢性脑缺血后皮层、海马的HIF-1α、EPO、VEGF/VEGFR2、GLUT-1的蛋白表达逐步升高，造模后6周蛋白表达高峰，8周时开始下降。（4）慢性脑缺血后皮层HIF-1α、EPO、VEGFR2、GLUT-1基因表达逐渐增高，6周时达到高峰。（5）造模后1周、3周、6周、8周观察大鼠学习记忆能力（Morris水迷宫）、脑组织病理形态学、缺氧信号转导通路，发现造模后6周大鼠各项指标变化最为显著，提示2-VO法制备VD模型，在6周时痴呆最为明显，造模效果最佳。（6）益肾化浊法提高慢性脑缺血VD大鼠学习记忆功能，改善神经元和星形胶质细胞形态，可能与增加HIF-1α、VEGF蛋白和基因表达及GLUT-1基因表达有关。说明益肾化浊法可能通过调节HIF-1a及下游靶点VEGF来改善慢性脑缺血VD病理损伤，从而发挥治疗作用。.本项研究初步揭示了缺氧信号转导通路HIF-1α在慢性脑缺血导致痴呆的作用机制，为治疗痴呆提供新的防治途径；益肾化浊法通过调节HIF-1a及下游靶点VEGF来改善慢性脑缺血VD病理损伤，从而发挥治疗作用，为中药治疗痴呆提供依据。