载脂蛋白A1模拟肽在内皮祖细胞参与血管内皮损伤修复中的作用及其机制

内皮祖细胞（EPC）对各种致病因素所致内皮系统损伤的修复可抑制动脉粥样硬化的发生发展。机体内环境的病理改变如血脂、血糖异常等可造成EPC损害。而循环血液中的高密度脂蛋白（HDL）可保护并促进EPC的功能。申请人先前在美国加州大学的研究证明HDL的主要蛋白成分载脂蛋白AI的模拟肽具有明显的增强内皮细胞功能和抑制内皮细胞凋亡作用，但相关机制尚不清楚。因此我们提出模拟肽的内皮损伤修复机制可能涉及模拟肽增强EPC抗损伤修复能力、促进EPC增殖分化和抑制EPC凋亡。申请人在前期工作即模拟肽可保护EPC功能和增加骨髓EPC数量的实验结果基础上，进一步探索模拟肽作用于EPC的信号转导路径和对EPC损伤修复的影响；并观察模拟肽对血脂异常模型鼠动脉内皮损伤处和外周血及骨髓源EPC数量和功能的作用，期待从EPC修复损伤血管内皮的角度阐明模拟肽对内皮系统的损伤修复机制。迄今未见模拟肽与EPC损伤修复关系的报道。

本课题通过流式细胞仪、荧光显微镜、分子生物学、细胞培养等手段，采用在体动物实验和体外细胞水平实验来研究载脂蛋白AⅠ (apoA-Ⅰ) 模拟肽在内皮祖细胞参与血管内皮损伤修复中的作用及其机制。结果发现：(1) 通过差速贴壁方法分离出具有晚期EPC生物学特性的细胞亚群，并发现分离的最适贴壁时间为3天；(2) 模拟肽能部分通过PI3K/AKT/eNOS通路来提高内皮祖细胞功能；(3) 模拟肽通过激活PI3K/AKT/eNOS 通路和抑制 NF-κB/iNOS通路保护LPS诱导的内皮祖细胞的损伤；(4) 模拟肽部分通过抑制CHOP信号途径减轻ox-LDL所诱导的人血管内皮细胞凋亡；(5) 模拟肽能通过抑制高脂饮食诱导的体内炎症来提高小鼠外周血和动脉壁EPC数量和功能来修复血管内皮损伤。上述结果证明模拟肽通过提高内皮祖细胞数量和功能，并抑制炎症因子诱导的内皮祖细胞和血管内皮细胞损伤来修复血管内皮，为抑制动脉粥样硬化发生发展提供新的治疗靶点。