我国禽波氏杆菌血清型和基因型分析

禽波氏杆菌病是申请者1990年在国内首先发现的新型细菌性传染病，可垂直传播，引起种蛋孵化率降低，雏禽呼吸道疾病。前期研究业已表明不同分离株的免疫特性及主要基因序列存在着明显的差异，由此推断，禽波氏杆菌不同菌株存在着抗原性和基因型的不同。为此，利用现已分离到的来自不同家禽类别的257株禽波氏杆菌代表株，通过一定处理方法，免疫家兔制备抗血清，再经交叉免疫试验、吸附试验，制备抗禽波氏杆菌O、K、H单因子血清，采取血清学试验方法，对分离菌进行血清型分析，建立血清分型方法，了解我国流行菌株的血清型；再通过设计特异性引物，用建立在PCR基础上的RFLP和SSCP技术，对不同禽波氏杆菌分离株的基因进行分析，建立基因分型方法，了解我国流行菌株的基因型；进而探索不同血清型、基因型菌株与致病性、免疫原性的相关性。该研究将为禽波氏杆菌分型系统建立奠定基础，为流行病学调查、诊断、预防和治疗提供理论依据。

本研究首先进行了禽波氏杆菌单因子血清的制备及血清型初步鉴定。试验利用波氏杆菌的14个菌株分别制备相应的全菌免疫原，然后免疫1Kg左右的健康家兔，最后采血制备抗血清。分别对14个抗血清进行效价测定均集中在1：4800～1：3200。用已制备好的相应抗原与抗血清进行交叉吸收试验，得到I型和II型两种单因子血清，两种单因子血清的效价分别为1：800和1：1024。不同血清型的单因子血清不与其他血清型菌株发生凝集。利用试验获得的两种单因子血清对实验室已获得的禽波氏杆菌分离株进行血清型的鉴定，证明分离到的P1～P10、P15、LL、XT菌株血清型均为血清I型，P11～P14的血清型则属于II型。. 对禽波氏杆菌RAPD基因分型进行了研究。用细菌基因组抽提试剂盒对22株禽波氏杆菌的DNA进行提取，获得了高纯度和高浓度的细菌基因组DNA，并建立了稳定性和重复性好的RAPD扩增程序。经过对一系列随机引物的筛选，有6条引物能够产生清晰且多态性好的条带。运用筛选的6条随机引物对22株B.avium进行扩增，获得了RAPD指纹图谱。运用分析软件对指纹图谱进行统计分析，计算出各菌株间的遗传距离并进行聚类分析，绘制亲缘关系树状图，最终以遗传距离0.402为界将22株B.avium分成了3个聚类群，其中第一聚类群又可以分为3个亚群，第三聚类群可以分为两个亚群。其中第一聚类群包括了2000年之前的10个分离株（Ba1-Ba10）和2001年之后分离到的Ba12、Ba13、Ba14、Ba20，第二聚类群和第三聚类群中均为2001年之后的分离株，其中Ba15、Ba17、Ba18、Ba22属于第二聚类群，Ba11、Ba16、Ba19和Ba21属于第三聚类群。. 本研究为进一步对其进行系统的血清分型，研究各血清型之间致病性的差异，了解国内外禽波氏杆菌的主要流行菌株的生物学特性，以及更好地了解禽波氏杆菌病的致病机理和免疫机理奠定了基础。