免疫抑制剂-犬尿氨酸作为复合表位噬菌体1型糖尿病疫苗佐剂的研究

Type 1 diabetes is an autoimmune disorder due to the pancreatic β cell damage with pancreatic. Recovering tolerance or down-regulating the immune response to non-harmful antigens is a better ideal way to treat autoimmune diseases through administrating a mixture of special antigen with immunosuppressant adjuvant that decreases the strength of the immune response. Human Glutamic acid decarbocylase(GAD)65 and heat shock protein (HSP60) have been recognized as key antigens among islets autoantigens in the progression of T1DM. Kynurenine (Kyn), an endogenous substance, is safer than exogenous substances as a vaccine adjuvant and can induce Treg mediated immune tolerance. In this study, we will construct a phage displayed multiple-epitope vaccine containing the 190-515 amino acid sequence of GAD65 and the 437-460 amino acid sequence of HSP60. We will evaluate the effect of immunosuppressant-Kynurenine as adjuvant co-immunized with multiple-epitope Phage Vaccine to induce Treg cells and tolerogenic responses, and to prevent Diabetes 1 disease in NOD mouse model.

1 型糖尿病（T1DM）是自身免疫系统紊乱损伤胰岛 β 细胞造成的自身免疫性疾病。因此调节免疫反应，提高机体对自身抗原的耐受是治疗T1DM的策略之一。故采用特异性抗原与致耐受性或抑制性佐剂联合免疫机体，诱导机体产生针对特异性抗原的免疫耐受或免疫抑制，是一种较为理想的治疗策略。谷氨酸脱羧酶(GAD65)与人热休克蛋白 60( HSP60) 是 T1DM 中胰岛 β细胞重要的自身抗原。犬尿氨酸（KYN）是一种新型免疫抑制剂，它能够促进T细胞分化为Tregs，而且是生理性的物质。本项目拟将GAD65的190-315位氨基酸序列及HSP60的437-460位的P277肽构建于T7噬菌体制成复合表位噬菌体疫苗，将KYN作为免疫佐剂与噬菌体疫苗混合并免疫非肥胖糖尿病小鼠（NOD），评价该佐剂在诱导机体生成Treg 细胞及免疫耐受的有效性，验证该免疫策略对NOD小鼠的保护效果。

1 型糖尿病（T1DM）是自身免疫系统紊乱损伤胰岛 β 细胞造成的自身免疫性疾病。故调节免疫反应，提高机体对自身抗原的耐受是治疗T1DM的策略之一。采用特异性抗原与致耐受性或抑制性佐剂联合免疫机体，诱导机体产生针对特异性抗原的免疫耐受或免疫抑制，是一种较为理想的治疗策略。谷氨酸脱羧酶(GAD65)与人热休克蛋白 60( HSP60)是 T1DM 中胰岛β细胞重要的自身抗原。犬尿氨酸（KYN）是一种新型免疫抑制剂，它能够促进T细胞分化为Tregs。本项目将GAD65的190-315位氨基酸序列及HSP60的437-460位的P277肽构建于T7噬菌体制成复合表位噬菌体疫苗，将KYN作为免疫佐剂与噬菌体疫苗混合并免疫非肥胖糖尿病小鼠（NOD），评价该佐剂在诱导机体生成Treg 细胞及免疫耐受的有效性，验证该免疫策略对NOD小鼠的保护效果。研究发现：① KYN与抗原的联合使用能明显下调抗原诱导的体液免疫应答强度，具有削弱抗原免疫原性的作用，说明KYN是一种抑制性疫苗佐剂。②KYN能提高NOD小鼠CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的生成，促进IL10、TGF-β的分泌，诱导Th2型免疫反应的偏向。③GAD65190-315噬菌体疫苗单独使用及与KYN佐剂联合使用，能够降低NOD小鼠的血糖值，并且提高小鼠的生存率及生存状态，病理结果显示小鼠胰岛细胞损伤减轻。④进一步研究显示，KYN作为抑制性佐剂，能够抑制 DCs 细胞的成熟，增加分泌抑制型细胞因子 IL-10 的产生。⑤与氢氧化铝、地塞米松、FK506相比，KYN佐剂与GAD65190-315噬菌体疫苗共同免疫NOD小鼠能够抑制胰岛β细胞的损伤。⑥经RNA-seq检测发现，KYN佐剂通过调控胰岛素信号通路，胰岛素抵抗信号通路，Foxo信号通路，Th17分化信号通路等通路调节免疫反应。