肝脏树突状细胞依赖IL-27通路调控小鼠肝移植免疫耐受机制

我们前期研究发现，自发耐受的小鼠移植肝中CD25+FoxP3+T细胞明显增多，Th17细胞在急性排斥的大鼠移植肝中比例增高。而Treg和Th17细胞的平衡在移植免疫中发挥重要作用。另外我们发现小鼠肝脏树突状细胞（LDC）高表达IL-27分子，并在体外诱导CD25+FoxP3+T细胞扩增。因此推测LDC通过IL-27/IL-27R通路（参与Treg和Th17细胞分化）诱导Treg扩增同时抑制Th17细胞而调节肝移植免疫耐受。本课题利用小鼠肝移植自发耐受模型，通过CFSE荧光示踪、IL-27阻断等，首先研究LDC是否通过IL-27/IL-27R通路实现对CD25+FoxP3+T细胞诱导扩增和对Th17细胞分化及功能抑制的调控；其后，体内经抗体阻断、LDC过继输注、基因敲除小鼠等手段研究依赖IL-27/IL-27R通路的LDC免疫调节特性与肝移植自发耐受的相关性，以期发现肝移植免疫耐受新机制。

本项目以小鼠肝脏树突状细胞（LDC）为研究对象，CD25+FoxP3+T 细胞（Treg)扩增为切入点，利用小鼠肝移植模型，研究肝脏树突状细胞通过IL-27/IL-27R通路发挥免疫调节的作用及其与小鼠肝移植免疫耐受的相关性，以期发现LDC不同于传统BMDC而特有的免疫功能，进而阐明LDC等肝脏非实质细胞在肝移植自发耐受中的作用。经过四年的研究，较好地完成了研究内容，达到预期目的。主要研究结果综述如下：（1）建立了B6到C3H小鼠较为稳定的同种异体原位肝移植模型，长期存活可超过60天以上；同时，开展了大鼠肝移植急性排斥模型作为本项目研究的重要补充部分；目前该模型较为稳定。肝移植术后长期存活60天以上小鼠移植肝中CD4+CD25+FoxP3+T细胞比例明显增高。（2）与BMDC相比较，LDC表现出更强的致免疫耐受的分子表型和细胞因子分泌特性：LDC几乎不分泌IL-12，但分泌IL-10和IL-27，经LPS刺激后IL-27分泌进一步增加;同时，细胞表面免疫负调分子B7H1表达增高，而MHC-Ⅱ、CD86等分子表达相对较低;（3）肝移植后长期存活的小鼠，其体内移植肝、脾脏、淋巴结T细胞对同种抗原的识别活化、增殖和效应性T细胞的产生、成熟没有明显抑制：同种肝移植术后长期存活小鼠的肝、脾、淋巴结等免疫细胞则存在明显增殖现象，同时也表达较高水平的IFN-γ；体内细胞毒性T细胞杀伤试验也显示对同种抗原存在CTL杀伤效应。（4）LPS-LDC对同种T细胞免疫抑制作用：LPS-LDC刺激的同种T细胞产生更多的IL-10因子,并一定程度抑制了同种T细胞的增殖反应；同时，诱导同种T细胞表达高IL-10R、FoxP3，低IFN-γR、CCR5、T-bet、CCR3，选择性扩增CD4+CD25+FoxP3+T细胞；其扩增的CD4+CD25+ T细胞显著抑制由抗CD3抗体或同种抗原刺激的CD4+T细胞增殖反应，并呈MHC非特异性；（5）LDC通过IL-27/IL-27R通路诱导CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞扩增：与野生型Balb/c小鼠相比，IL-27R-/-小鼠LPS-LDC诱导扩增CD4+CD25+Treg细胞的功能受到明显抑制，而与B7H1通路无明显相关。综上所述，LDC通过IL-27/IL-27R 通路在肝移植免疫耐受中发挥重要作用，从而促进了肝移植小鼠的长期存活。