c-FLIP(L)双向调节在乳腺癌TRAIL凋亡诱导中的作用机制

TRAIL为肿瘤坏死因子超家族成员，因其选择性杀伤肿瘤细胞、保护正常细胞，成为很有前途的抗肿瘤药物。但目前发现部分肿瘤对TRAIL治疗不敏感，主要与该通路下游调控因子c-FLIP(L)密切相关。综合本课题组前期在结肠癌和乳腺癌研究中发现的、截然相反的调控结果，初步提出c-FLIP(L)对受体凋亡通路起到双向调节作用。本项目拟以c-FLIP(L)不同表达量的乳腺癌细胞系为实验对象，通过正、反向改变蛋白表达水平，应用免疫共沉淀、pull-down及激光共聚焦等方法，综合观察蛋白表达量、与底物的亲和力（二聚体形成）和亚细胞定位对c-FLIP(L)双向调节作用的影响。在此基础上，评价c-FLIP(L)对动物成瘤及TRAIL疗效的作用。研究结果不仅有助于阐明c-FLIP(L)对乳腺癌TRAIL凋亡诱导的具体调控机制，又可进一步丰富肿瘤细胞凋亡理论，而且可为临床选择TRAIL治疗提供有意义的分子标志。

本课题在2013.01-2013.12间的研究周期内，已按计划完成实验内容，基本实现了预期的研究规划，并增加了对人类乳腺癌组织标本的实验。研究结果显示，c-FLIP(L)是乳腺癌TRAIL凋亡通路的重要调节因子，它对TRAIL的凋亡诱导具有双向调节能力。TRAIL是近年来肿瘤生物治疗领域的研究热点，该因子能够特定诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常组织细胞不产生杀伤作用。本课题以TRAIL通路下游调节分子c-FLIP(L)为研究靶点，应用可诱导表达系统基因转染、RNA干扰、Western blot、免疫共沉淀、流式细胞术以及免疫组化等多种实验方法，通过体内、体外和人乳腺癌组织实验，多角度、多层次观察到细胞内c-FLIP(L)蛋白表达量是影响其调节作用的关键因素，c-FLIP(L)发挥凋亡调节作用主要位于胞膜附近的死亡诱导信号复合物内。此外，我们在研究c-FLIP(L)凋亡调节能力的同时，还观察到c-FLIP(L)-p43亚基能够影响细胞增殖提示，无论促进或阻断凋亡传递均离不开对caspase-8的剪切和活化。凋亡和增殖是细胞不可分割又截然相反的两种生物学现象，c-FLIP(L)在调节凋亡的同时又影响增殖似乎符合逻辑推理，但具体的分子机制仍需要进一步深入的研究和探讨。在人类组织中，凋亡调节因子c-FLIP(L)在乳腺癌中高表达，是重要的分子标志物，其表达程度在不同的乳腺癌分子分型中存在明显差异，对患者的个体化治疗和预后评判具有重要的临床提示意义。鉴于c-FLIP(L)对TRAIL通路的双向调节作用，我们初步提出c-FLIP很可能是TRAIL治疗的选择性标志物，即对TRAIL耐药的肿瘤细胞首先要检测c-FLIP表达水平。如果c-FLIP高表达，可以应用特异性降低c-FLIP联合TRAIL的方法；如果c-FLIP低表达，说明TRAIL对该肿瘤治疗无效，需要改换其他治疗手段。针对c-FLIP(L)的深入研究将有助于丰富肿瘤细胞凋亡调控理论，并为肿瘤的生物治疗提供新的靶点和途径。在研究期限内，核心期刊发表综述1篇，培养硕士研究生1名（已毕业），中华期刊投稿1篇（已通过初审），核心期刊投稿1篇（已通过初审），SCI杂志投稿2篇（其中一篇IF=3.062，J Cell Biochem，已回修；另一篇=2.406，Biochem Bioph Res Co，正在审稿中）。