Tfr细胞调控鼻息肉局部免疫球蛋白产生的机制研究

Nasal polyp (NP) is an inflammatory disease that remains difficult to treat despite advances in medical and surgical therapy. The production of local immunoglobulins (Igs) in NP was associated with recurrence after surgery. Follicular helper T cells (Tfh) were present in ectopic lymphoid tissues (eLTs) of NP, which can assist B cells in local class swich to plasma cells, leading to Ig overexpression. Indeed, recent studies have found that there are follicular regulatory T cells (Tfr) in lymph nodes, which can specifically inhibit Tfh cells and B cells to inhibit the germinal center response, further inhibiting the production of immunoglobulin. The applicant found that Tfr cells were present in eLTs of NP. We assume that the local imbalance of Tfr/Tfh ratio in the nasal mucosa and the down-regulation of CTLA-4 expression in Tfr cells were the critical factors leading to the overexpression of Igs, and vitamin D improves defective Tfr cells and inhibits the overexpression of Igs in NP. In this project, we will try to elucidate the role of Tfr cells in the pathogenesis of NP through human NP sample study, in vitro cell culture and ex vivo tissue culture experiment, and animal experiment. Flow cytometry, immunopathology, and molecular biology techniques will be used to study phenotypic expression and function. We believe this project will provide novel insights into the pathogenesis of NP. Also, this project will provide a new way for the the precise treatment of NP.

鼻息肉（NP）一种慢性炎症性疾病，其治疗预后不佳。免疫球蛋白（Igs）的产生可能与NP的临床预后不佳密切相关。在NP患者的鼻腔黏膜异位淋巴组（eLTs）中存在的滤泡辅助性T细胞（Tfh）可以在局部辅助B细胞产生Igs。但是淋巴结中存在的滤泡调控性T细胞（Tfr）能特异性的抑制Tfh和B细胞接触，从而抑制Igs的产生。申请人发现在NP鼻腔黏膜eLTs中同样存在Tfr细胞，但NP中Tfr细胞如何调控Tfh和B细胞反应迄今还不清楚。我们推测失衡的Tfr/Tfh比例和Tfr细胞CTLA-4下调是Igs过表达的关键因素，而维生素D可改善受损Tfr细胞，抑制Igs的过表达。本课题拟通过对人体标本的分析、体外细胞及组织培养、小鼠模型的建立，采用流式细胞分析、组织病理学、分子生物学等技术手段探讨Tfr细胞在NP发病机制中的作用，并为NP的治疗提供新思路。

背景：鼻息肉中的异位淋巴组织（eLTs）及其位于eLTs中的滤泡辅助性T细胞（Tfh）导致局部大量免疫球蛋白的产生，扁桃体和外周血中的滤泡调控性T（Tfr）细胞可以抑制Tfh细胞的功能并抑制免疫球蛋白的产生，然而鼻息肉eLTs中是否存在Tfr细胞以及Tfr细胞的功能目前并不清楚。.目的：评价鼻息肉eLTs中是否存在Tfr细胞，Tfr细胞的表型及功能如何。.方法：通过免疫荧光染色和细胞流式的方法确定鼻息肉中Tfr细胞是否存在，数量如何；通过细胞流式的方法比较鼻息肉与扁桃体和外周血中Tfr细胞的表型；分选出鼻息肉和外周血Tfr细胞分别于Tfh细胞和B细胞共培养，通过ELISA的方法检测细胞因子和免疫球蛋白的产生。.结果：Tfr细胞主要存在于鼻息肉的eLTs中，和无eLTs的鼻息肉以及正常的下鼻甲组织相比，有eLTs的鼻息肉中Tfr细胞与Tfh细胞的比率显著下降，鼻息肉中Tfr细胞以高表达CXCR5、Foxp3，低表达CCR7、CCD62L为特点；与外周血相比，鼻息肉Tfr细胞CTLA-4表达下调，这可能与Tfr细胞对Tfh细胞产生抗体的抑制能力下调相关，并且外周血Tfr细胞阻断CTLA-4后抑制能力显著减弱；相比于外周血和扁桃体，鼻息肉中Tfr细胞维生素D受体的表达下调，重要的是，维生素D治疗后的Tfr细胞CTLA-4表达上调，并且恢复其抑制功能。.结论：有eLTs的鼻息肉中Tfr细胞功能缺陷导致局部免疫球蛋白过量产生，维生素D治疗可以恢复Tfr细胞的抑制功能。