嗜酸粒细胞性鼻息肉中肥大细胞对局部B细胞IgE产生的调控与机制

Chronic rhinosinusitis with nasal polyps (CRSwNP) is a heterogeneous disease, and eosinophilic and non-eosinophilic CRSwNP (Eos CRSwNP and non-Eos CRSwNP) have different pathogenic mechanism. Our previous work found that, independent of atopy, local IgE production can activate mast cells and lead to subsequent eosinophilic inflammation in eosinophilic CRSwNP. However, the mechanism of high level local IgE production in Eos CRSwNP is not clear. Through CD40L/CD40 pathway, mast cells could induce proliferation and immunoglobulins production in B cells. Base on our previous work, we presume that mast cell may play a role in the regulation of local IgE production in B cell in Eos CRSwNP. We will isolate local mast cells and B cells from both Eos and non-Eos CRSwNP and peripheral blood B cells from control patient by utilizing magnetic activated cell sorting. By coculture mast cells and B cells and key molecule pathway blockage, class switch recombination related molecules and IgE production are determined. This study will identify the regulating mechanism of local IgE production in B cells by mast cells in eosinophilic CRSwNP and make us further understand the underlying pathomechanism between Eos and non-Eos CRSwNP.

鼻息肉是一种异质性疾病，嗜酸粒细胞性鼻息肉与非嗜酸粒细胞性鼻息肉存在不同的发病机制。本项目前期工作发现，独立于系统过敏反应，局部高浓度IgE的产生及其介导的肥大细胞活化与表型转变在嗜酸粒细胞性鼻息肉中起重要作用。然而，嗜酸粒细胞性鼻息肉中局部高浓度IgE产生机制尚不明确。研究显示，肥大细胞可通过CD40L/CD40与B细胞相互接触发生作用，促进B细胞增殖及免疫球蛋白的产生。基于我们前期研究基础，我们推测嗜酸粒细胞性鼻息肉中肥大细胞可能参与局部B细胞IgE产生的调控。本项目将利用免疫磁珠分离不同类型鼻息肉组织肥大细胞与B细胞以及对照外周血B细胞，通过不同组织来源肥大细胞与B细胞共培养及关键分子通路阻断，检测B细胞IgE表型转换相关产物及IgE的产生。研究结果将明确嗜酸粒细胞性鼻息肉中肥大细胞对局部B细胞IgE产生的调节作用与机制，深化鼻息肉异质性潜在病理机制，进一步阐明鼻息肉发病机制。

我们前期研究提示国人鼻息肉据组织学分型可分为：嗜酸粒细胞性鼻息肉和非嗜酸粒细胞性鼻息肉。嗜酸性粒细胞性鼻息肉组织局部 IgE 含量显著增高，并且组织局部可以合成IgE, 而这种IgE增高并不依赖特异性体质或者经典Ⅰ型变态反应。有研究报道肥大细胞可通过 CD40L/CD40 与 B 细胞相互作用，促进 B 细胞增值及免疫球蛋白产生。我们前期研究发现鼻息肉局部 B 细胞及肥大细胞数量显著升高。我们假设嗜酸粒细胞性鼻息肉中，肥大细胞可能参与局部 B 细胞 IgE 产生的调控。. 本项目首先进一步证实嗜酸粒细胞性鼻息肉中IgE 含量及肥大细胞数量较非嗜酸粒细胞性鼻息肉及对照下鼻甲显著升高。另外流式细胞检测发现嗜酸粒细胞性鼻息肉组织中肥大细胞占组织单个核细胞的百分比较非嗜酸粒细胞性鼻息肉及对照下鼻甲同样显著升高。免疫荧光共染实验发现嗜酸粒细胞性鼻息肉中不仅有较多 B 细胞及肥大细胞浸润，而且肥大细胞和 B 细胞常常位置毗邻甚至相互接触。免疫磁珠分离嗜酸粒细胞性鼻息肉组织肥大细胞，抗 IgE 处理后，BAFF, IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, IL-21, TGF-β, IL-6, TNF-α,IL-1β,IL-8 以及 CXCL10 等细胞因子及趋化因子表达显著上调。免疫荧光实验进一步证实鼻息肉组织中肥大细胞均有以上细胞因子及趋化因子的表达。利用免疫磁珠分离嗜酸粒细胞性鼻息肉组织肥大细胞与正常对照外周血 B 细胞，组织来源肥大细胞抗 IgE 处理后与外周血 B 细胞共培养，检测 B 细胞 IgE 表型转换相关产物及 IgE 含量。 结果发现肥大细胞抗 IgE 处理后与 B 细胞共培养可诱导 B 细胞产生大量 IgE。. 本研究证实在嗜酸粒细胞性鼻息肉中，肥大细胞辅助参与B细胞IgE的合成与分泌，使我们进一步理解嗜酸与非嗜酸粒细胞性鼻息肉潜在的病理机制。