结核杆菌对人γδT细胞产生IL-17的调控机制的影响

已知γδT细胞参与机体抗结核分枝杆菌（Mtb）感染免疫应答，最近发现产生IL-17的γδT细胞在TB病人明显升高，但这类细胞产生IL-17的调控机制尚未清楚。本项目拟采用不同的结核杆菌抗原刺激外周血γδT细胞，并观察不同细胞因子（IL-1β, Il-6, IL-23, IFN-γ和TGF-β等）在诱导其产生IL-17中的作用。通过构建几种转录因子（Th1和Th17特异性，T-bet，Eomes和RORγt等）基因序列特异性siRNA病毒载体，观察细胞转染后对目的基因的沉默效应，以及对γδT细胞产生IL-17的抑制或增加作用，以了解γδT细胞产生IL-17的调控机制，为阐明γδT细胞抗Mtb感染免疫机制提供更详尽的科学数据。

应用多色荧光抗体染色技术和流式细胞术检测胞内细胞因子的方法，检测健康人和结核病人外周血标本中γδ T细胞不同亚群中产生IL-17的γδ T细胞（即Tγδ 17细胞）的比例后发现，正常人及TB患者的Tγδ 17细胞中均以Vδ3-8亚群最多；正常人Tγδ 17细胞中Vδ2亚群最少，而TB患者中的Tγδ 17细胞中Vδ2亚群明显升高；TB患者的Tγδ 17细胞中Vδ1亚群明显低于正常人。.应用结核杆菌不同抗原和其他刺激剂，同时加IL-17诱导极化细胞因子组合培养纯化的γδ T细胞10天后，用流式或ELISPOT方法检测Tγδ 17细胞的产生，发现诱导Th17细胞极化的细胞因子组合对Tγδ 17细胞有同样的诱导极化作用，而且在Vδ3-8细胞亚群中也有Tγδ 17细胞被诱导分化。结核杆菌的多肽类抗原比磷酸类抗原可诱导更多Tγδ 17细胞，而抗TCRγδ+抗CD28+CKs组合可诱导出最多的Tγδ 17细胞。.本项目的实验结果有助于深入了解人外周γδ T细胞中产生IL-17的细胞亚群分布和产生条件，以及结核杆菌感染对Tγδ 17细胞产生IL-17调节作用。.