γδT细胞通过IL-17调控CRSwNP组织中嗜酸性粒细胞浸润的机制

The eosinophil infiltration in nasal mucosal plays an important role in chronic rhinosinusitis with nasal polyps (CRSwNP), and is frequently associated with poor prognosis. However, the mechanism of eosinophil infiltration remains unclear. Our recent study demonstrated that there was a positive correlation between γδT cells expression and eosinophil infiltration, and the highest expression of γδT cells was found in CRSwNP, followed by that in chronic rhinosinusitis without nasal polyps and that in normal nasal mucosa. It was affirmed that γδT cells are the major producers of IL-17 in psoriasis. We suggest that γδT cells maybe regulate the eosinophil accumulation in nasal mucosa via overexpressing IL-17 in CRSwNP. The proposed study intends to evaluate the expression of γδT cells in nasal mucosa and its correlation with IL-17 by using qRT-PCR and immunohistochemistry, to comfirm that specific γδT cell subtype is the major source of IL-17 by using gene scanning in the knockout mice model, to study the potential mechanism that γδT cells regulate the eosinophil infiltration via IL-17 by using adoptive transfer and antibody blocking. The proposed study will be helpful to gain more insight into the role of γδT cells in local immune response of CRSwNP, and provide a potential approach in developing a new treatment strategy and improve the prognosis of this disease.

嗜酸性粒细胞（Eos）浸润与慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）的预后密切相关，而鼻黏膜局部Eos浸润的调控机制不明。我们前期发现：γδT细胞在CRSwNP中表达最高，且与Eos浸润程度正相关。新近发现IL-17是银屑病皮损中γδT细胞产生的重要致炎因子，据此推测：鼻黏膜局部γδ T细胞通过表达IL-17调控Eos浸润。本项目拟通过组织标本检测获得CRSwNP鼻黏膜γδT细胞与IL-17直接相关的可靠证据；然后通过致炎因子激发Tcra-/-、Tcrd-/-小鼠，采用基因扫描技术确定鼻黏膜局部产IL-17的特异性γδT细胞亚群；最后通过同源γδ T细胞优势亚群过继转移、特异性IL-17抗体封闭技术，证实特异性γδT细胞亚群通过IL-17调控Eos浸润。本项目旨在阐明CRSwNP中以γδT细胞为核心的局部免疫应答机制，为完善CRSwNP发病理论，寻求新的局部治疗方案，改善疾病预后提供科学依据

嗜酸性粒细胞浸润（Eos）与慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）预后密切相关，而鼻黏膜局部Eos浸润调控机制不明。本项目首先通过组织标本检测发现γδT和IL-17在EosCRSwNP中表达较其他组增高，鼻黏膜中γδT计数与Eos百分比正相关；通过流式双标记TCRγδ及IL-17发现γδT细胞可分泌IL-17，且产IL-17的γδT在CRSwNP中高于其他组，明确了γδT和IL-17直接相关；其次，通过鼻黏膜组织上清液多因子检测发现EosCRSwNP组Eos趋化因子eotaxin表达增高，鼻黏膜局部γδT与Eos浸润正相关；通过qRT-PCR检测明确了Vγ1+γδT与Eos阳离子蛋白ECP表达正相关，提示γδT可能参与嗜酸性粒细胞趋化；3.为明确γδT是否产生IL-17，通过CRSwNP、CRSsNP及对照鼻黏膜组织单细胞悬液流式细胞检测发现产IL-17的细胞主要有Tc细胞（Tc17）、Th细胞（Th17）和γδT细胞（γδT17），且Tc17和γδT17在息肉中的表达高于对照组，Th17表达在各组见无明显差异；产IL-17最多的细胞是Tc细胞；基于文献报道γδT主要在炎症早期发挥作用，现有样本源自手术病人，炎症持续时间长，不能准确反映炎症早期γδT产LL-17的情况，拟运用小鼠模型，在致炎早期检测鼻黏膜中IL-17的表达，阐明γδT是炎症早期IL-17的主要来源；4.为明确γδT通过产IL-17促Eos浸润，成功构建了Eos浸润型CRS小鼠模型，拟联合TCRγ及IL-17抗体封闭处理/不处理、IL-17刺激处理，明确γδT通过IL-17促Eos趋化；并培养了人原代鼻黏膜上皮细胞和γδT，拟通过两种细胞共培养及IL-17刺激人原代鼻黏膜上皮细胞证实γδT通过IL-17促上皮细胞分泌Eos趋化因子，佐证动物实验。5.研究还发现EosCRSwNP以黏膜水肿为主要特征，MMP9表达增高；IL-17可促进人原代鼻黏膜上皮细胞分泌MMP9，提示γδT可能通过产生IL-17促进息肉间质水肿形成；6.γδT与EosCRSwNP中Th2型炎症因子增高有关，提示γδT还可能间接促进Th2炎症因子分泌促进Eos趋化，体外机制研究尚在进行；通过临床随访观察发现γδT及Eos高表达与CRSwNP不良预后有关。如上研究将完善γδT促Eos浸润机制，为开发CRSwNP治疗靶点提供依据。