基于微环境调控作用探讨化瘀消癥杀胚中药对早期异位妊娠滋养细胞的调控机制研究

科学假说：滋养细胞及其侵袭微环境是异位妊娠发生的"种子"和"土壤"的关系，化瘀消癥杀胚中药复方可能通过对抑制滋养细胞侵袭微环境来干预滋养细胞向周围组织的侵袭治疗早期异位妊娠。运用细胞学和裸鼠移植技术，建立人源输卵管妊娠绒毛滋养细胞移植裸鼠动物体内模型，结合离体人源滋养细胞模型，采用双向凝胶电泳-飞行时间质谱获得中药干预后的绒毛组织的蛋白表达特征谱；从组织、细胞、基因、蛋白四个水平，探讨化瘀消癥杀胚中药对早期异位妊娠滋养细胞的调控机制作用：①采用光镜、电镜观察干预后的绒毛滋养细胞的组织结构的影响；②Wesrtern-blot检测细胞凋亡及其相关基因的表达，流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率；③ 采用qRT-PCR检测雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、细胞外基质（ECM）、人输卵管特异性糖蛋白(hOGP) 的表达。

基于输卵管妊娠“种子与土壤”学说， 首次创建了裸鼠体内移植模型，利用qRT-PCR技术采用检测雌激素受体（ER） 、孕激素受体（PR）和基质金属蛋白酶（MMPs）。利用Western-blot技术检测滋养细胞凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达，中药组较西药组及阴性对照组ER、PR降低，说明中药拮抗雌孕激素，导致绒毛变性坏死Bax表达升高，导致滋养细胞入侵、渗透作用减弱，最终绒毛变性坏死. 成功建立了宫内早孕滋养细胞、输卵管妊娠滋养细胞模型。离体培养输卵管妊娠及正常宫内早孕滋养细胞具有相似的生长特征及形态学表现。化瘀消癥杀胚中药复方可显著降低输卵管妊娠滋养细胞的侵袭能力，有抑制输卵管妊娠滋养细胞增殖、促进其凋亡的作用；高剂量中药组甚至优于阳性对照组的效果。首次将输卵管妊娠滋养细胞及宫内早孕滋养细胞同时作为化瘀消癥杀胚中药复方干预的对象，更深入细致的探索中药复方在两种滋养细胞凋亡形态学及诱导凋亡细胞通路方面的异同。从侵袭、凋亡、分泌等不同侧面寻求化瘀消癥杀胚中药复方有效性的依据，为输卵管妊娠“种子与土壤”学说提供理论依据。初步通过蛋白组学探索了中药复方干预前后的输卵管壶腹部组织的差异蛋白，并进行验证，为进一步蛋白组学研究奠定基础。