基于HPLC-MS质控下的化瘀消癥杀胚中药对人输卵管妊娠滋养细胞影响的研究

输卵管妊娠是妇科常见病，临床上对早期输卵管妊娠药物治疗的疗效肯定。本研究以化瘀消癥杀胚中药宫外孕复方作为干预手段，以体外培养的人输卵管妊娠滋养细胞作为研究对象，通过高效液相-质谱联合分析方法（HPLC-MS）分别对化瘀消癥杀胚中药宫外孕复方进行中药复方指纹图谱分析、对灌服宫外孕复方的SD大鼠血清及空白SD大鼠血清进行检测并定性差比分析。用经质控有化瘀消癥杀胚有效物质的大鼠含药血清，对人输卵管妊娠滋养细胞进行体外培养。通过①采用光镜、电镜观察化瘀消癥杀胚中药复方对输卵管绒毛蜕膜组织结构的影响；②用流式细胞术（FCM）进行绒毛蜕膜细胞DNA含量分析，观察宫外孕复方对输卵管妊娠滋养细胞凋亡及其相关基因Bcl-2的表达；③实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测化瘀消癥杀胚的宫外孕复方对雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响。

本研究以体外培养的人输卵管妊娠滋养细胞作为研究对象，以三种不同的大鼠血清作为干预手段，通过高效液相—质谱联合分析方法（HPLC-MS）分别对灌服化瘀消癥杀胚中药复方的大鼠血清、肌注甲氨蝶呤的大鼠血清及喂服生理盐水的大鼠血清进行检测并定性差比分析。用以上三种血清对人输卵管妊娠滋养细胞进行体外培养。进而得出以下结果：①通过光镜、电镜观察，免疫荧光激光共聚焦显微镜扫描鉴定滋养细胞特异性蛋白，化学发光法测定培养液中的β-HCG亚单位等方法，从形态、生长特性、功能等方面鉴定体外培养的细胞为滋养细胞。②通过高效液相--质谱（HPLC-MS）联合分析方法，在灌服化瘀消癥杀胚中药后的大鼠血清中找到丹参酮ⅡA、丹酚酸B、芍药苷、瓜氨酸、左旋紫草素和ββ’-二甲基丙烯酰阿卡宁，初步判定，中药含药血清中确实存在化瘀消癥杀胚复方所有药物成分（以上成分分别为丹参、赤芍、天花粉、紫草的对照品）。③含有化瘀消癥杀胚成分的含药血清培养滋养细胞，与其他两组比较，能下调抑制凋亡蛋白Bcl-2，降低Bcl-2/Bax比值，促进凋亡；上调MMP-2的表达，加速输卵管蜕膜的溶解；下调PR、ER的表达，促使绒毛组织变性、坏死；进而起到治疗输卵管妊娠的作用。