基于微环境调控作用探讨活血化瘀法对脑肿瘤干细胞侵袭行为的干预机制

研究假说：脑肿瘤干细胞(Brain tumor stem cells, BTSCs) 及其侵袭微环境分别是脑肿瘤形成和复发的"种子"和"土壤"；活血化瘀方剂能抑制BTSCs的侵袭微环境，从而干预BTSCs向周围组织的侵袭。. 血瘀与肿瘤的侵袭密切相关, 活血化瘀是肿瘤的有效治则。BTSCs是脑肿瘤的"种子"细胞，在微环境的作用下，BTSCs向周围脑组织侵袭是脑肿瘤治疗失败和复发的重要原因。血瘀可能为主导BTSCs侵袭扩散的外部环境。本课题研究活血化瘀法预防肿瘤细胞侵袭机理。主要从VEGF/VEGFR、CXCL12/CXCR4、MMP-9/TIMP的表达，以及肿瘤微血管新生等方面，研究各类活血化瘀 (养血活血、活血散瘀、破血逐瘀)的代表方剂对BTSCs侵袭微环境及侵袭能力的作用机理，建立中药调控BTSCs侵袭微环境的研究基础，为未来研发抗脑肿瘤侵袭扩散的新药打下基础。

血瘀证与血液的高粘状态密切相关，而多数恶性肿瘤患者有血瘀证的表现，气滞血瘀贯穿于肿瘤的各个病理阶段及其整个发病过程。活血化瘀中药有改善肿瘤患者血瘀状态的确切作用，而被认为有抗恶性肿瘤的作用。脑肿瘤干细胞(Brain tumor stem cells, BTSCs) 及其侵袭微环境分别是脑肿瘤形成和复发的"种子"和"土壤"；活血化瘀方剂散瘀的过程，有利于消除BTSCs的侵袭微环境，从而干预BTSCs向周围组织的侵袭。.含活血化瘀中药血清干预组TIMP1mRNA免疫荧光BTSCPCR定量值分别为A组1.132±0.067；B组2.632±0.067；C组0.925±0.028。与对照组比较，B组差异有显著统计学意义（P<0.05），而B、C组差异无显著统计学意义（P﹥0.05），提示B组能促进BTSC的TIMP1表达。VEGFRmRNA免疫荧光PCR定量值分别为A组、B组能抑制VEGFR的表达，但抵当汤促进VEGFR表达，与对照组比较，B组差异有显著统计学意义（P<0.05），而B、C组差异无显著统计学意义（P﹥0.05）。CXCR4mRNA免疫荧光PCR定量值分别为：A组0.971±0.014；B组0.474±0.063；C组1.099±0.066，与对照组比较，B组差异有显著统计学意义（P<0.05），而B、C组差异无显著统计学意义（P﹥0.05），表明血府逐瘀汤能促进TIMP1的表达，抑制VEGFR及CXCR4的表达，A组，C组则无显著作用。用含药血清及脑瘤组织匀浆上清处理的BTSCs细胞进行划痕试及小室侵袭实验，发现A组及B组划痕修复能力明显受抑制，C组无明显抑制。在Transwell侵袭试验中，观察BTSCs穿透小室基底膜的情况，与对照组相比，B组穿透基底膜明显受抑制。而A组及C组无明显抑制。对照组肿瘤内血管密度最密集，B组及A组血管密度较稀疏。对照组、A组、B组、C组各组MVD分别为：33.7±4.0，19.5±3.1，17.4±3.7，24.6±2.3，CD34在有无中药干预组之间的差异具有统计学意义（P﹤0.05）。.活血化瘀中药有一定的抗肿瘤侵袭的作用，但各种活血化瘀中药抑制各种侵袭因子的表达存在程度差异,抑制肿瘤干细胞侵袭行为的药效有明显差异。在常见的活血化瘀方剂中，血府逐瘀汤是一种有应用前景的抗脑瘤侵袭的活血化瘀中药。