miR-26a靶向Pim-3影响淋巴瘤细胞凋亡及其作用机制的研究

Diffused large B cell lymphoma (DLBCL) is a type of B cell lymphoma with high heterogeneity. Now research of DLBCL is focused on finding new therapy targets. Pim-3 is associated with tumorigenesis and our previous data have showed that expression levels of Pim-3 gene are upregulated in lymphoma cell lines and tissues.And treatment with Pim-3 inhibitor enhanced apoptosis of tumor cells and inhibited their proliferation. Bioinformatic analysis suggests a target site of miR-26a in the 3′UTR area of Pim-3.Our hypothesis is Pim-3 might be one of target genes of miR-26a and miR-26a plays a important role in lymphoma tumorigenesis. Therefore it is important to investigate the interaction between miR-26a and Pim-3, and their effects on cytobiologic character of lymphoma cells. We plan to detect expression level of miR-26a on clinical samples, to varify Pim-3 regulation with miR-26a and their effects on tumorigenesis by experiments in vitro and with mice model. Our results will be helpful to clarify the molecular mechanisms of lymphoma tumorigenesis, which would provide theoretical foundation and experimental data for finding new clinical therapy targets.

弥漫性大B 细胞淋巴瘤是一组高度异质性B 细胞恶性淋巴瘤，寻找新的治疗靶点是其研究的重点和难点。Pim-3与肿瘤形成相关联，我们前期数据表明Pim-3基因在淋巴瘤细胞和组织中表达上调，当被抑制后，肿瘤细胞增殖减少，凋亡增加。生物信息学分析提示Pim-3基因3′UTR存在miR-26a结合靶位点。文献报道miR-26a表达下调参与肿瘤发生与侵袭转移。我们提出假设Pim-3可能是miR-26a调控的靶基因，miR-26a在淋巴瘤发生机制中起重要作用。因此明确miR-26a与Pim-3之间的相互作用及其对淋巴瘤细胞生物学行为的影响非常必要。本课题目的即是通过检测临床标本中miR-26a的表达情况、体外实验和小鼠淋巴瘤模型相结合探索miR-26a对Pim-3的可能调控作用及在淋巴瘤发生中的影响，为深入理解淋巴瘤发生的分子机制和寻找新的治疗靶点提供理论基础和实验依据。

肿瘤组织具有高度异质性，恶性肿瘤转移依然是肿瘤患者死亡的主要原因，开展肿瘤转移分子机制研究有利于寻找到新的肿瘤标记物及临床治疗靶点，实施个体化治疗，对于提高和监控疗效具有十分重要意义。Pim-3是丝/苏氨酸激酶Pim家族成员，与多种内胚层来源肿瘤发生相关联，但Pim-3与肿瘤转移之间关系及其分子机制研究报道尚少。本项目探讨了Pim-3与肿瘤发展关系，本研究结果表明Pim-3在多种肝细胞肝癌细胞株均有较高表达量，过表达Pim-3促进肝细胞肝癌细胞增殖、细胞黏附、细胞迁移和侵袭能力。采用免疫共沉淀和质谱检测相结合方法筛选到了与Pim-3间存在直接相互作用蛋白CAD，为探索Pim-3参与肝细胞肝癌转移分子机制奠定了基础。Pim-3表达量与卵巢癌患者临床转移特征相关联，Pim-3过表达与卵巢癌FIGO分级、组织病理亚型和肿瘤远端转移等指标间存在关联。Pim-3过表达能促进卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖和迁移能力。另外，卵巢癌中Pim-3表达水平与MACC1表达水平呈正相关，在SKOV3细胞中过表达Pim-3过表达可上调MACC1表达，提示MACC1参与卵巢癌侵袭，有助于预估卵巢癌临床中Pim-3的治疗价值。体内实验部分我们观察了Pim-3在免疫缺陷裸鼠体内成瘤情况，结果表明与载体对照细胞相比，Pim-3过表达细胞在裸鼠体内成瘤能力明显增强。此部分内容为阐明Pim3肿瘤转移机制奠定了实验基础。本项目检测了不同转移能力肝细胞肝癌细胞系microRNA芯片和长非编码RNA芯片，筛选了与肝细胞肝癌发展相关联的microRNAs和长非编码RNAs，为探索肝细胞肝癌转移可能表观遗传调控机制奠定了基础。我们亦探讨了卵巢癌临床标本中lncRNA-UCA1表达情况及其与临床意义之间关系，发现卵巢癌组织中lncRNA-UCA1表达水平上调，lncRNA-UCA1高表达水平与肿瘤分期、组织病理类型、腹水和淋巴结转移相关联。此研究结果表明lncRNA-UCA1可能参与卵巢癌转移，是卵巢癌潜在生物标记物及治疗靶点。本项目亦深度调查了RNA pull-down实验中潜在地非特异性结合蛋白，以期发现RNA pull-down实验结果富集到非特异性结合蛋白可能原因，提供了使用RNA pull-down方法鉴别RNA相互作用蛋白背景蛋白的组成参考，并指出优化RNA pull-down实验必要性。