基于文库筛选的miR-483-3p介导c-Myc转录通路调控胃癌发生的新机制研究

miRNA介导的基因活性调控是当前肿瘤研究的热点。我们首次用miRNA阻遏物文库进行了胃癌发生相关miRNAs的功能筛选，通过体内外实验明确了其中的miR-483-3p在胃癌发生中的重要作用。结合文献研究和转录因子预测结果提示其可能介导原癌基因C-Myc的转录调控，我们应用C-Myc的特异性抑制剂处理胃癌细胞后miR-483-3p的表达下调，初步证实了我们的设想。本项目拟借助染色质免疫沉淀技术进一步明确其与C-Myc的直接作用；采用基因表达谱芯片和蛋白质双向电泳结果结合靶基因联合预测的结果，筛选miR-483-3p作用的下游靶基因，通过共转染和RMA干扰技术等进行鉴定；并在临床胃癌标本上验证miR-483-3p及其靶基因与胃癌发生及预后的相关性。本项目有望拓展我们对miRNA介导的新信号途径在胃癌发生中的作用机制的理解，并为寻找新的胃癌预防、治疗药物提供一定的理论依据。

MicroRNA （miRNA）是一大类内源性非编码小RNA，通过转录后翻译抑制或靶mRNA裂解参与细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程。为深入阐释miRNA在胃癌发生过程中发挥的重要作用，揭示相关miRNA在胃粘膜细胞癌变中受到的转录调控和对基因表达的调控机制，我们利用miRNA阻遏物文库首次在胃癌细胞中以增殖表型为模型，进行了基于微电子传感器阻抗变化的胃癌增殖相关miRNA的高通量功能缺失性筛选，发现了12个能明显抑制胃癌细胞增殖的anti-miRNA分子。其中miR-483-3p的抑癌作用最为显著。分析发现，miR-483-3p位于宿主基因胰岛素样生长因子受体（IGF）2的第7个内含子中。截至目前，尚未见miR-483-3p参与肿瘤发生发展的相关报道。本课题将对此进行探讨。我们的研究结果发现：.miR-483-3p明显促进胃癌细胞增殖。miR-483-3p以BRCA2为靶基因参与促胃癌信号通路的调控。BRCA2在胃癌中发挥抑癌作用。miR-483-3p受c-Myc的直接转录调控。miR-483-3p是新的促胃癌增殖相关miRNA，其上游受c-Myc直接转录调控，下游负调控BRCA2，由此胃癌发生过程中形成一个由miR483-3p介导的c-Myc促胃癌发生的调控新机制。.本课题进展顺利，发表了一片影响因子大于5的SCI论文。