MSC修饰CCL2调控STAT3-RORγt抑制狼疮Th17的机制研究

间充质干细胞（MSC）移植治疗系统性红斑狼疮（SLE）已取得显著疗效，但机制不明。Th17与SLE病程相关。我们研究发现，SLE患者MSC存在异常，异基因MSC显著抑制SLE的Th17分化及IL-17产生，同时改变SLE体内趋化因子配体2（CCL2）及STAT3的水平。CCL2受体-CCR2与STAT3相关，STAT3与RORγt为Th17分化及IL-17产生的关键分子。我们假设MSC可能通过基质金属蛋白酶（MMPs）修饰CCL2作用于CCR2-STAT3-RORγt通路调控Th17。因此，本课题将以MSC移植治疗SLE患者和模型鼠，比较移植前后CCL2修饰状态、MMPs、CCR2、STAT3、RORγt等分子表达与Th17功能的变化，并以MSC与Th细胞体外共培养体系，探索MSC是否通过MMPs修饰CCL2调控STAT3-RORγt通路抑制Th17而治疗SLE，为其临床应用提供依据。

系统性红斑狼疮(SLE)是一种多器官受累的自身免疫性疾病，近年来间充质干细胞（MSCs）应用于治疗SLE已取得显著疗效，但机制不明。课题组既往研究发现MSCs显著减少SLE患者体内的辅助性T细胞17(Th17)比例及IL-17水平。文献报道MSCs可分泌基质金属蛋白酶(MMPs)水解趋化因子配体2（CCL2）而改变其生物活性。故本课题假设，MSC可能通过产生MMPs修饰CCL2而调控Th17。因此，本课题检测了SLE患者和正常对照者外周血和骨髓MSCs培养上清的CCL2、MMPs、IL-17浓度及Th17比例，并以体内体外实验检测了MSCs对狼疮鼠Th17的调控，以及MMPs-CCL2-CCR2途径在其中的参与作用，从而为MSCs移植用于临床治疗SLE提供理论依据。结果发现，SLE患者血清及MSC培养上清中MMP2、MMP8及CCL2浓度显著升高，患者外周血Th17比例及其表面CCR2、IL-17的水平显著升高，证实MSC通过产生MMPs特别是MMP2、MMP8调节CCL2产生，CCL2通过其受体调控Th17分化及IL-17产生。小鼠体外实验发现，正常MSCs抑制naïve T细胞分化为Th17，且存在剂量依赖性，而CCL2的中和抗体导致MSCs-naïve T细胞共培养体系中Th17比例升高，提示MSCs对Th17的抑制效应可被CCL2抑制剂阻断，证实MSCs通过产生CCL2而抑制了Th17分化。小鼠体内实验发现，正常人MSCs移植导致狼疮鼠的尿蛋白、血清IgG、抗dsDNA、ANA及IL-17水平、肾脏免疫复合物沉积均明显下降，同时血清MMP2、血清CCL2、脾脏Th17数量及其CCR2和IL-17表达显著下降，而抗小鼠CCL2抗体增强了MSCs的上述治疗效应，进一步证实了MSCs-MMPs-CCL2-CCR2-Th17-IL-17的作用通路。此外，狼疮鼠Th17体外培养体系发现，重组CCL2上调Th17及其CCR2表达，但MMP剪切的CCL2（mpCCL2）下调了Th17及其CCR2表达，证实MSCs确实通过分泌MMPs修饰了CCL2，使其对Th17细胞的调节由促进作用转化为抑制作用，最终下调了患者的Th17细胞而缓解SLE患者病情。