平肺口服液调控人肺腺癌细胞PPAR-γ/β-catenin信号通路的研究

为了明确平肺口服液治疗肺癌的作用机理，本研究在前期工作的基础上，选择肿瘤增殖相关因子的上游信号通路PPAR-γ/β-catenin为研究对象，体内实验采用人肺腺癌细胞株A549裸鼠移植模型，研究平肺口服液对PPAR-γ/β-catenin的调控作用，观察PPAR-γ、β-catenin的 mRNA 和蛋白质的表达及下游因子P27、cyclin E、caspase3、VEGF及血清脂联素的变化。体外实验采用血清药理学的方法，观察平肺口服液含药血清对人肺癌细胞A549中PPAR-γ、β-catenin、P27、cyclin E、caspase3的 mRNA 和蛋白质水平表达的影响。并应用特异性PPAR-γ阻断剂观察中药对此通路的特异性。有望阐明平肺口服液治疗肺癌的可能通路和有效药物靶标，证明中药的多靶点治疗效应。相关研究方法和结果可为中药抗肿瘤研究提供鉴。

我们在国家自然科学基金的资助下，选用体内与体外两种实验方式研究中药治疗肺癌的机理，体内研究结果显示：顺铂＋平肺组瘤组织重量明显低于模型组（P＜0.01)，瘤组织PPAR-γ阳性表达分别高于顺铂组及模型组（P＜0.01)，其血清脂联素水平也高于其他实验组（P＜0.01)，且瘤组织Ki-67的表达较模型组相比亦明显减少（P＜0.01)。提示以养阴清肺为治法组方的平肺口服液治疗肺癌的疗效主要表现为抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞调亡、调节机体免疫平衡及代谢状态。体外实验进一步研究观察含药血清与浸膏对肺癌细胞中PPAR-γ等上游信号通路的变化，应用CCK-8法检测人肺腺癌A549细胞的增殖显示，平肺浸膏生药1mg/ml在体外作用72h内对细胞生长没有明显影响，平肺浸膏生药5mg/ml和10mg/ml在作用24h、48h和72h表现出对A549细胞增殖的抑制作用，与空白对照组相比存在统计学差异（P<0.05）。应用流式细胞术检测不同浓度平肺浸膏对A549细胞凋亡的影响，结果显示平肺浸膏10mg/ml作用17h可引起A549发生早期凋亡及死亡，与空白对照组相比存在统计学意义，在此实验基础上又观察了在不同组别培养上清中添加不同浓度GW9662，观察到 GW9662可以拮抗平肺口服液对A549细胞生长的抑制作用。本研究初步明确了平肺口服液治疗肺癌的有效药物靶标，对揭示中药与化疗药治疗肿瘤的疗效差异及可能机理提供数据支持。