益气化瘀方有效单体配伍协同调节软骨细胞钙离子信号的机制研究

脊柱慢性退变性疾病的病理基础是椎间盘退变，椎间盘退变的本质是维持正常功能的软骨细胞数目的减少。. 益气化瘀方是施杞教授治疗脊柱慢性退变性疾病的经验方，已开发为新药，有独特的工艺流程和质量控制标准。前期研究中已经证明该复方对脊柱退变性疾病的炎症指标有明显的改善作用，该复方成份的药理作用涉及到钙信号调节。. 本研究拟利用IL-1诱导体外培养的软骨细胞，模拟炎症损伤的过程，研究软骨细胞内钙离子在炎症损伤时的变化规律，综合利用中药指纹图谱、药理血清学技术和正交实验设计， .研究复方药物中有效单体调节软骨细胞钙离子信号的配伍机制，得到最优组合，为开发新一代复方单体中药奠定基础。

目的：利用数据挖掘技术对施氏临证处方时的用药规律进行分析，追踪核心药对的有效组分，利用细胞钙离子检测技术研究其配伍协同的机制，并在组织器官和动物模型上做进一步的验证。.方法：1.建立施杞教授治疗颈椎病患者的数据库，利用关联规则分析用药规律。 2.利用复杂网络技术分析“施氏通痹12方” 交互信息表配伍机制。3.核心药对单体对体外3D培养的椎间盘相关ECM代谢因子的影响。4.建立小鼠膝骨关节炎模型，单体复方关节内冲洗观察疗效。.结果：1.301例颈椎病患者中，常用药对的关联规则运算结果，气血类中黄芪→当归的支持度最高，黄芪→川芎的提升度最高。“施氏通痹12方”君药频次最高排前三位，臣药排在其后。根据中医君臣佐使组方的原则，利用君臣佐使三重权重方法成功的建立了“施氏通痹12方”的交互信息表，可视化表达了核心药对与其他药对的相关性。2.川芎嗪和黄芪甲苷在中浓度时有一定的钙离子拮抗能力，复方1和复方4仍起到拮抗效果，表明组合有协同作用；川芎嗪和黄芪甲苷单独干预后，升高蛋白多糖，抑制基质代谢酶表达，复方干预后，升高蛋白多糖，抑制蛋白多糖酶表达，下调炎症因子表达，升高MGF表达。3.川芎嗪组软骨终板空隙有改善，但纤维环结构疏松，髓核着色力仍不强。黄芪甲苷组纤维环结构紧密，软骨细胞着色力明显增强。复方1组，纤维环结构紧密，髓核内部着色力增强。复方4组纤维环结构紧密，软骨细胞着色力强，髓核深染明显，器官水平PCR实验结果与细胞学基本一致。4.复方4关节冲洗可以明显改善模型小鼠膝骨关节炎形态学Mankin评分，II型胶原免疫组化结果也表明其具有延缓关节软骨基质中II型胶原降解的作用。.结论：1.数据挖掘技术名老中医档案，分析其个体临床经验，实现其经验的有效总结与传承的有利工具。中医君臣佐使的辨证思维可以通过分层和权重数据化来模拟，本研究对君臣佐使理论的数据化和网络化实践，做出了新尝试。2.核心药对黄芪和川芎主要活性成分，川芎嗪和黄芪甲苷一定浓度时可拮抗IL-1β的致炎作用，低剂量的复方组合仍然可发挥这种抗炎效果，实验结果表明复方作用指标更全面，效果更稳定。3.中药单体和复方组合通过抑制炎性因子表达，调节ECM胶原和蛋白多糖表达，抑制基质代谢酶的升高，从而稳定ECM代谢平衡。复方4抗炎效果明显影响指标多，促进MGF的表达，对小鼠膝骨关节炎有一定的改善作用，体现了单体组合的协同机制。