左右归丸对培养人未成熟卵母细胞(IVM)影响的研究

如何提高辅助生殖技术成功率是生殖医学研究重要课题之一，卵母细胞体外成熟研究是该领域的热点。以"肾主生殖"为理论基础的中医药通过神经-内分泌-免疫网络等调节促进卵泡发育改善生殖功能、提高辅助生殖技术成功率方面具有重要作用。本课题在前期补肾中药可增加大鼠窦前卵泡数、卵泡总数及促进小鼠卵母细胞体外成熟研究基础上，率先设计将补肾中药应用于人卵母细胞体外成熟（IVM）研究，拟采用卵母细胞体外培养技术、玻璃化冷冻技术、卵胞浆内单精子显微注射技术(ICSI)、免疫组化技术、分子生物学技术等多种手段，进行左、右归丸对人卵母细胞成熟培养的研究，建立补肾中药介入IVM的新方法，通过检测卵细胞发育过程中HLA-G表达、MPF表达、卵丘细胞FSH-R、LH-R表达及成熟卵母细胞ICSI后胚胎发育潜能研究，阐明左、右归丸对人未成熟卵细胞影响机制，丰富中医"肾主生殖"客观内涵，为中医药在辅助生殖技术应用奠定基础。

根据拟定的研究内容及目标，本课题开展并完成了如下研究(1）左右归丸含药大鼠血清对人、鼠卵母细胞体外成熟和受精的影响；(2）含药大鼠血清促进卵母细胞体外成熟的机制；(3）可溶性HLA-G（sHLA-G）在卵母细胞成熟过程中作为生化指标的应用。结果显示，含药血清对人和小鼠卵母细胞的体外成熟具有明显的促进作用，并获得与FSH相似的结果；含药血清促进卵母细胞体外成熟的机制可能涉及FSH受体及其相关信号通路，包括PKA/ MAPK信号通路与PKC信号通路；收集人卵母细胞培养液检测sHLA-G显示，在培养液中可检出sHLA-G，但浓度较低。因此， 作为评价卵母细胞体外成熟的生化指标，还需要完善检测sHLA-G的方法学研究并提高其灵敏度。