左、右归丸对冻融大鼠卵巢组织移植后血管生成的影响

如何保存和恢复因卵巢疾病而失去卵巢功能妇女生育力及生殖内分泌功能是生殖医学研究的重要课题，卵巢组织冷冻和移植研究已成为该领域的研究热点，以"肾主生殖"为理论基础的中医药在促进生殖系统血管生成、调控卵巢生殖功能等方面具有重要作用。本研究率先设计将补肾中药左、右归丸应用于卵巢组织冷冻保存和移植中，拟采用程序冷冻技术、组织移植技术、显微操作技术、细胞体外培养技术、免疫组化技术、分子生物学技术等多种技术手段，进行左、右归丸对大鼠卵巢组织冷冻保存的影响研究，进行左、右归丸对冻融大鼠卵巢组织自体移植和异体移植后血管生成的影响研究，建立补肾中药介入卵巢组织冻存和冻融卵巢组织移植的新方法，阐明补肾中药在促进冻融卵巢组织移植后血管生成的作用机制，丰富中医"肾主生殖"、"精血同源"的客观化内涵，为中医药在保存女性生育力、恢复生殖内分泌功能、延缓女性衰老等生殖医学领域的应用奠定基础。

目的：如何保存和恢复因卵巢疾病而失去卵巢功能妇女生育力及生殖内分泌功能是生殖医学研究的重要课题，卵巢组织冷冻和移植研究已成为该领域的研究热点。冻融卵巢组织移植后的缺血损伤，是影响卵巢组织移植后卵泡成活率和卵巢组织生命周期长短的重要因素。以“肾主生殖”为理论基础的中医药在促进生殖系统血管生成、调控卵巢生殖功能等方面具有重要作用。.方法：本研究拟采用程序冷冻技术、组织移植技术、免疫组化技术、分子生物学技术等多种技术手段，进行左、右归丸对大鼠卵巢组织冷冻保存的影响研究，左、右归丸对冻融大鼠卵巢组织移植后卵巢组织学特性、生殖内分泌功能、血管生成、卵泡体外成熟和体外发育影响研究。.结果：所有冷冻卵巢组织正常形态卵泡均显著低于新鲜卵巢组织（P﹤0.05）；冷冻卵巢组织正常形态的卵泡，10%、15%左右归丸含药血清组显著高于5%含药血清组和空白对照组（P﹤0.05）。新鲜卵巢组卵母细胞凋亡率显著低于所有冷冻组（P﹤0.05）；冷冻卵巢组织卵母细胞凋亡率， 10%、15%左右归丸含药血清组显著低于5%含药血清组和空白对照组（P﹤0.05）。各卵巢组织移植组的正常卵泡比率均显著低于新鲜卵巢组织(P﹤0.05)，但冷冻卵巢组织移植后与冷冻复苏组织相比没有统计学差异（P﹥0.05）；各移植组卵巢组织内的细胞及细胞器保存良好，左、右归丸组与对照组相比正常卵泡比率差异无统计学意义（P﹥0.05）；各卵巢组织移植组间FSHR和LHR的平均光密度值比较没有显著差异（P﹥0.05）。冷冻卵巢组织移植后，卵巢组织的微血管计数值、VEGF和VEGFmRNA表达水平，左、右归丸组显著高于对照组（P﹤0.05）。各组间未成熟卵母细胞的比率没有显著性差异（P﹥0.05）；未成熟卵的体外成熟率、卵裂率和囊胚形成率，左、右归丸组显著高于对照组（P﹤0.05），但对受精率没有显著影响（P﹥0.05）。.结论：补肾中药左、右归丸能有效提高冷冻卵巢组织的卵泡成活率；有效促进冻融卵巢组织移植后血管的生成和重建，有利于恢复生殖内分泌功能和生育能力。