基于LPS/TLR4/NF-κB信号通路探讨PCOS慢性低度炎症特征及补肾化痰方对卵巢局部炎症微环境的调控作用

The chronic low-grade inflammation is known to contribute to polycystic ovary syndrome (PCOS), It has been found that local inflammatory microenvironment in ovaries can lead to ovulation failure and eventually make the body obese, oligo-ovulation, insulin resistance.The LPS/TLR4/NF-κB is the main pathway causing inflammation. We study the characteristics of chronic low-grade inflammation of PCOS.The previous clinical study showed Bushen Huatan Decoction significantly promoted ovulation, improved the insulin resistance and decreased body weight. It suggests that the Bushen Huantan Decoction could attenuate the chronic low-grade inflammation and local inflammatory microenvironment in ovaries of PCOS. In this study, we will research on the signal transduction pathway of chronic low-grade inflammation of PCOS by Elisa, Western blot, gene chip and other experimental techniques, to explore the mechanisms and effective targets of Bushen Huatan Decoction on local inflammatory microenvironment in ovaries of PCOS.

慢性低度炎症可能是多囊卵巢综合征（PCOS)的发病机制之一，卵巢局部炎症环境易发生排卵障碍，机体慢性炎症状态与卵巢局部炎症环境是发生肥胖、稀发排卵、胰岛素抵抗的主要原因。LPS/TLR4/NF-κB信号通路是发生慢性低度炎症的经典信号通路，我们借此研究PCOS慢性低度炎症的特征表现，根据临床及动物实验发现补肾化痰方能够显著改善排卵、胰岛素抵抗和减轻体重，提出补肾化痰方可能对PCOS慢性低度炎症及卵巢局部炎症微环境有调控作用。本课题采用来曲唑诱导建立PCOS大鼠模型，通过时间动态观察大鼠生理、促炎细胞因子水平变化及卵巢局部炎症微环境特征，再拟用Elisa，Western blot，NF-κB PCR基因芯片等实验技术，探索PCOS慢性低度炎症可能的发生机制及信号转导途径，同时进行卵巢颗粒细胞培养，提取补肾化痰方药物血清，观察其对PCOS卵巢局部炎症微环境的调控作用。

慢性低度炎症可能是多囊卵巢综合征（PCOS)的发病机制之一，卵巢局部炎症环境易发生排卵障碍，LPS/TLR4/NF-κB信号通路是发生慢性低度炎症的经典信号通路，本课题采用来曲唑诱导建立PCOS大鼠模型，通过时间动态观察大鼠生理、促炎细胞因子水平变化及卵巢局部炎症微环境特征，采用Elisa，Western blot，NF-κB PCR基因芯片等实验技术进行检测。结果显示来曲唑诱导的大鼠模型具有PCOS的临床表现，来曲唑造模后6周（LET1）、12周（LET2）与相应对照组（Con1与Con2）比较，血清FG、TG、TC、LDL-C、INS、AND、DHEAS、SHBG、T、LBP、TNFa、LPS、CD14、IL-8、IL-6、TNF-α、IL-1β、hsCRP水平均显著升高，差异有统计学意义（P<0.05），同样的结果在卵巢颗粒细胞检测中也被发现。对于细胞学研究，中药复方补肾化痰方治疗后，LET1B与LET2B组分别与LET1与LET2组比较，细胞上清液中炎症因子TNFa、LBP、LPS、CD14、IL-8、IL-6、TNF-α、IL-1β、hsCRP水平显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。LET1、LET2与相应对照组Con1与Con2比较，卵巢组织与脂肪组织中TLR4、胞核NF-κB p65蛋白水平表达明显升高，差异有统计学意义（P<0.05），而胞浆NF-κB p65的表达显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。LET1、LET2与相应对照组Con1与Con2比较，卵巢颗粒细胞中TGF-β1蛋白水平表达明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；中药复方补肾化痰方治疗后，LET2B与LET1B两组分别与LET2与LET1比较，TGF-β1蛋白水平表达显著低，差异有统计学意义（P<0.05）。检测了各组卵巢组织中84个NF-κB信号转导应答关键基因的表达，结果显示四组组间比较，ACTB、CXCL3、NQO1、SELP基因的表达差异有显著性。结论：来曲唑诱导的大鼠模型具有PCOS合并慢性低度炎症特征并且卵巢局部呈现慢性低度炎症状态，细胞学显示补肾化痰方可以通过对LPS/TLR4/NF-κB炎症通路中的炎症因子的有效抑制作用达到治疗PCOS慢性低度炎症的目的。