T1R2/3-PKC βⅡ-Ca2+通路调控小肠葡萄糖运载蛋白GLUT2及益气健脾方药的干预作用

胃肠道营养物质吸收属"脾运化水谷精微"的范畴，营养物质吸收障碍是"脾失健运"重要内容之一。益气健脾方药能明显改善脾气虚证的葡萄糖吸收障碍。葡萄糖运载蛋白2（GLUT2）是葡萄糖经小肠吸收的关键转运体，肠道甜味受体是启动GLUT2转运葡萄糖的关键步骤。脾气虚证"不欲饮食"与肠道甜味受体葡萄糖感受能力下降病机相符。推论益气健脾方药可能经T1R2/3-PKC βⅡ-Ca2+通路调控GLUT2改善葡萄糖的吸收。项目拟以动物实验观察脾气虚证及予以益气健脾中药治疗干预前后GLUT2介导的葡萄糖吸收能力和细胞顶膜GLUT2表达、T1R2/3-Ca2+-PKC βⅡ通路中相关因素的改变，在细胞模型中，通过拮抗相应环节，明确与T1R2/3-PKC βⅡ-Ca2+通路相关的GLUT2转运葡萄糖的调控机制以及益气健脾方药对该通路的调节作用。为探明脾气虚证本质及益气健脾方药作用机制提供依据。

脾主运化是脾的主要生理功能，研究表明脾虚时葡萄糖吸收减少。随着葡萄糖浓度增加，GLUT2成为葡萄糖摄取的主要运载蛋白。因此推测脾虚时糖吸收障碍可能与GLUT2的转运能力下降有关。益气健脾中药对脾虚证糖吸收障碍具有较好的改善作用，推测与GLUT2表达的改变有关。本研究从脾虚大鼠模型和体外Caco-2细胞葡萄糖吸收障碍模型两个方面，观察益气健脾中药人参对葡萄糖吸收的影响，探讨其改善糖吸收的作用机制。.分别建立利血平及大黄致脾气虚证大鼠模型用于葡萄糖吸收研究。模型组大鼠葡萄糖吸收量下降；GLUT2蛋白及mRNA表达显著下降。经过四君子汤治疗后，葡萄糖吸收量、GLUT2蛋白及mRNA表达均高于模型组。经人参治疗后，空肠对葡萄糖的吸收量也明显升高， GLUT2蛋白表达量上升，大鼠肠粘膜GLUT2 mRNA的表达量明显增加。.Caco-2单细胞层模型及稳定性同位素标记的葡萄糖方法。25μM和50μM人参皂苷Re能够显著促进葡萄糖吸收。根皮素和根皮苷能够显著抑制葡萄糖吸收；50μM浓度人参皂苷Re能够逆转根皮素的抑制作用，促进葡萄糖的吸收；100μM人参皂苷Re和人参多糖能够加重根皮苷的抑制葡萄糖吸收的作用。Caco-2细胞葡萄糖吸收模型中GLUT2蛋白及mRNA表达，根皮素能够显著抑制GLUT2蛋白表达及mRNA表达（P<0.01）；50μM浓度人参皂苷Re和高剂量人参多糖均能够逆转根皮素对GLUT2蛋白及mRNA表达的抑制作用，促进GLUT2蛋白及mRNA的表达。含有抑制剂根皮素时，低剂量的人参皂苷Rg1和高剂量的人参皂苷Rb1能改善根皮素对Caco-2细胞糖吸收的抑制作用，促进葡萄糖的吸收；根皮苷存在条件下，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1高、中、低剂量均下调Caco-2细胞吸收的葡萄糖含量。根皮苷和根皮素抑制后，Caco-2细胞中GLUT2蛋白表达均下降。用根皮素处理的细胞，给予人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1后，细胞中GLUT2蛋白表达有下降的趋势。用根皮苷处理的Caco-2细胞，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1可以下调GLUT2的蛋白表达。根皮苷和根皮素都可以降低GLUT2 mRNA的表达。在根皮素抑制的基础上加入人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1后，下调的GLUT2 mRNA表达有所上升，在根皮苷抑制后，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对GLUT2 mRNA的影响不明显。