p38MAPK/NF-κB信号通路对NASH炎症因子交汇调控作用及疏肝健脾方药干预的分子机制

以前期较好的研究工作为基础，以非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠为研究对象，以p38MAPK/NF-κB信号通路对NASH炎症因子的交汇调控作用为切入点，运用现代有关实验方法和技术。目的：①体内动态观察NASH肝细胞和Kupffer细胞中p38MAPK与NF-κB信号通路对TNF-α、IL-1、SAA1等炎症因子的影响及疏肝健脾方药干预前后上述有关指标的变化；②体外动态观察p38MAPK 与NF-κB通路对脂多糖（LPS）诱导大鼠肝细胞和Kupffer细胞有关指标的影响及疏肝健脾方药和p38MAPK、 NF-κB阻断剂干预前后有关指标的变化。主要预期结果：①明确两条通路之间在NASH病理演变过程中的相互作用和交叉对话机制；②探讨疏肝健脾治法方药对炎症因子在NASH病理演变中的作用特点和分子调控机制，深化中医对NASH的病因病机认识；③发现中药抗NASH作用的新靶点。

目的：观察非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肝组织、肝细胞和Kupffer细胞中p38MAPK与NF-κB信号通路对炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6的影响及疏肝健脾方药干预的作用机制。方法：利用高脂饲料喂养复制大鼠NASH动物模型，在同时给予高低剂量的疏肝健脾方药进行16周的干预后，检测大鼠心功能、肝组织和血清炎症因子水平以及肝组织、肝细胞和Kupffer细胞中TLR4、p-p38 MAPK、p38 MAPK、IKKβ、p-IKKβ、NF-κB mRNA和蛋白的表达。结果：模型组大鼠多伴有心脏舒张功能不全，肝组织、血清中TG、TC、TNF-α、IL-1、IL-6水平以及肝组织、肝细胞和Kupffer细胞中TLR4、p38 MAPK、IKKβ、NF-κB mRNA和蛋白的表达与正常组比较均有显著性差异(P<0.01，P<0.05)。各用药组大鼠的心舒张功能明显改善，以健脾高组、合方高组最为显著(P<0.01)；各用药组肝组织及血清中有关炎症细胞因子水平与模型组比较均有不同程度的降低，其中以健脾高、合方高组降低明显(P<0.01，P<0.05)；合方高组、健脾高组可显著抑制肝组织、肝细胞和Kupffer细胞TLR4、p38 MAPK、IKKβ、NF-κB mRNA和蛋白的表达（P<0.01，P<0.05）。结论和发现：肝郁脾虚且以脾虚偏重可能是NASH的重要病机。合方高及健脾高剂量药物能显著改善NASH大鼠心舒张功能不全，抑制肝组织、肝细胞及Kupffer细胞p38 MAPK/NF-κB信号通路的活化，降低炎症细胞因子释放，这可能是疏肝健脾方药显著改善NASH大鼠肝细胞脂肪肝变、脂质代谢紊乱及肝组织炎症等病理变化的重要机制，同时也可能是上述方药发挥作用的有效靶点。. 本项目的研究工作已完成，部分资料和数据正在整理之中。已在国内核心及以上期刊发表已标注国家自然科学基金资助的研究论文7篇，待发表5篇；培养博士生1名、硕士生2名，开展本项目研究的在读博士生2名，在读硕士生1名，预计2013年6月毕业1人，2014年6月毕业2人。