多梳蛋白EZH2在胰腺癌中沉默miR-34a的分子机制及其在肿瘤发生中的作用

microRNA-34a(miR-34a)的表达与肿瘤细胞增殖及侵袭密切相关。miR-34a在正常的胰腺导管上皮细胞中高表达,但在胰腺癌细胞及组织中表达显著降低。p53"缺失"解释不了miR-34a在胰腺癌中的低表达, 其沉默机制至今仍不清楚。多梳蛋白EZH2与肿瘤转移关系密切。申请者之前的研究证实EZH2在胰腺癌肿瘤发生中起了重要作用。申请者利用microRNA微阵列分析及qRT-PCR在两株胰腺癌细胞中检测到EZH2抑制后miR-34a表达显著上调。提示EZH2对miR-34a的表达沉默起了重要作用。本课题拟对胰腺癌细胞中EZH2沉默miR-34a的分子机制进行研究。本课题还将利用细胞及动物模型研究miR-34a沉默在EZH2导致的肿瘤发生中的作用。本课题研究结果将阐明miR-34a在肿瘤细胞中沉默的新机制, 为发展更有效的胰腺癌治疗方案提供理论依据。

微核糖核酸miR-34a在胰腺癌(PDAC)中表达沉默，但p53“失活”解释不了miR-34a的沉默机制，miR-34a在胰腺癌中表达沉默的机制迄今仍不清楚。我们之前的研究表明多梳蛋白EZH2在胰腺癌发生和转移中起了重要作用。通过microRNA微阵列分析和qRT-PCR，我们发现EZH2能显著下调miR-34a在胰腺癌细胞中的表达。采用siRNA敲除PDAC细胞中EZH2的表达可以明显上调miR-34a的表达，而敲降非编码长链RNA HOTAIR可以下调miR-34a的表达。在非瘤性胰腺导管上皮HPDE细胞中过表达EZH2全长蛋白及主要结构域显示EZH2全长蛋白明显抑制miR-34a的表达并促进细胞生长。采用miR-34a模拟物（mimics）转染稳定表达EZH2全长蛋白的HPDE细胞株发现，miR-34a模拟物抑制EZH2过表达诱导的HPDE生长促进作用。染色质免疫共沉淀实验发现EZH2过表达能增加H3K27me3， DNMT1、异染色质形成蛋白HP1A在miR-34a启动子的富集，表明EZH2通过诱导异染色质形成来沉默miR-34a的表达。