一个新的CD40突变体(H78Q)在胃癌上表达的临床意义及其在免疫逃逸中的作用

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，尽管化疗和手术等治疗手段不断提高，但是治疗效果尚不理想，有研究报道肿瘤细胞可以通过异常表达协同刺激分子而导致免疫逃逸。我们前期的研究发现，胃癌细胞上异常表达突变的CD40分子(H78Q)，该突变减弱了CD40与CD40L的结合能力，从而降低了T细胞的免疫应答。本研究是在前期工作的基础上，分别从DNA、RNA和蛋白水平检测胃癌肿瘤组织、癌旁组织和外周血单个核细胞中CD40突变体的表达情况，分析其表达与肿瘤病理的相关性；通过构建SCID小鼠胃癌肿瘤模型，研究分别表达正常和突变CD40的转基因胃癌细胞株在SCID小鼠中的肿瘤生长、转移及相关细胞因子的分泌情况；比较正常和突变CD40分子激发后其信号复合物的形成过程和胞内信号传导途径。从而探讨胃癌细胞表达CD40突变体参与免疫逃逸的机制，继而分析CD40突变体在胃癌细胞上表达的临床意义。

在本研究中，发现了一些肿瘤细胞株和新鲜肿瘤细胞表达CD40突变体（CAC→CAA， 78His→78Gln），该突变位点位于CD40胞外段第二个富含半胱氨酸的区域，这一区域是CD40与CD40L（CD154）相互作用的重要区域。在种系进化过程中第78位组氨酸高度保守，提示其对于维持CD40的正常结构和功能具有重要作用。经蛋白三级结构同源模拟推测，该突变很可能导致CD40局部构象发生改变，同时我们还发现该突变体可能以同源或异源三聚体的形式参与了CD40信号传导，由此提示其可能在肿瘤发生发展过程中具有重要的生物学作用。我们的研究发现胃癌组织表达的CD40突变体于胃癌的侵袭和转移相关，但是与肿瘤的大小，病理分期没有相关性。.同时研究CD40配体激发CD40信号对胃癌细胞AGS生长的影响，并探讨其分子机制，为治疗胃癌的药物研发提供实验依据。 以1 mg/L可溶性CD40配体（sCD40L）处理AGS，苔盼兰计数检测CD40激发对细胞增殖的影响；酶联免疫反应检测细胞培养上清中的血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平，并用抑制剂阻断VEGF信号通路，用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法探讨sCD40L对细胞增殖影响的分子机制。 sCD40L处理明显引起AGS细胞增殖；sCD40L激发促进细胞大量分泌VEGF（P<0.05），磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂能完全阻断这种效应（P<0.05）；VEGF受体抑制剂能显著减弱sCD40L对AGS细胞的增殖作用（P<0.05），而抗VEGF封闭型抗体则不能（P>0.05）。 CD40配体激发信号通过激活VEGF受体信号通路而诱导AGS细胞增殖。因此在CD40作为肿瘤治疗的靶分子时，需要慎重考虑它的激发方式。.对CD40分子的研究过程中，发现树突状细胞在抗肿瘤免疫过程中起着非常重要的作用，发现重组CD40L分子在体外具有诱导DC分化、成熟能力的基础上，进一步研究经CD40激发后的DC能抵抗IL-10抑制效应的功能，从而为更有效地进行DC的肿瘤免疫治疗开辟新思路，进一步研究还发现beta-葡聚糖能显著的促使DC诱导Th1细胞反应，起到抗肿瘤免疫效应。.截止目前本项目已发表论文8篇，其中SCI论文7篇，申请发明专利2项，获市科技进步二等奖1项。