基于基因组富集分析的人骨肉瘤粘着斑通路相关研究

骨肉瘤是20岁以下青少年中排名第二的致命性肿瘤，其病因和发病机理尚未完全阐明。我们已经利用基因组数据挖掘，对不同种属（人和犬）的与骨肉瘤相关的全基因组表达谱数据进行基因组富集分析，筛选出了影响骨肉瘤的重要通路（粘着斑通路）及关键基因（GRLF1、ITGA3、COL1A1、PIK3CA、PRKCG和PTK2）。在此基础上，我们拟采用PCR和免疫组化染色检测粘着斑通路中6个关键基因在人骨肉瘤组织和正常骨组织中mRNA和蛋白的表达。我们还准备采用TaqMan MGB等位基因分型，检测这6个基因在骨肉瘤患者和正常人群中的多态性。我们还准备构建慢病毒表达载体，对人骨肉瘤MG63细胞粘着斑通路中的6个关键基因分别进行RNAi调控，通过细胞水平的基因敲除实验，观察它们的表达被阻断后对肿瘤细胞的细胞周期、增殖活性、侵袭能力和裸鼠成瘤能力等生物学行为的影响，探讨粘着斑通路在人骨肉瘤发生中所起的作用。

骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤，以恶性程度高和预后差为主要特征，是儿童和青少年癌症相关的主要死亡原因。它的发病机制仍是不清楚的。因此，我们需要对骨肉瘤的发病风险和预后标记进行更深入的研究，从而寻找新的治疗靶点。. 在本项目的研究中，对粘着斑通路关键基因PIK3CA、COL1A1、PRKCG、ITGA3和GRLF1的基因型检测发现：PIK3CA rs7646409、COL1A1 rs1061970 及rs2075559、PRKCG rs2547362、ITGA3 rs2230392和GRLF1 rs1052667位点的多态性与骨肉瘤易感性相关，PIK3CA rs7646409、COL1A1 rs1061970、PRKCG rs3745406、ITGA3 rs2230392和GRLF1 rs1052667位点的多态性与骨肉瘤的转移风险存在关联，COL1A1 rs1061970、ITGA3 rs2230392和GRLF1 rs1052667位点的多态性影响了骨肉瘤病人的预后，此外，GRLF1 rs1052667位点多态性与肿瘤大小、分化程度等临床病理因素相关。我们的研究还证实：骨肉瘤组织中mGluR4和GRLF1表达明显高于癌旁组织和正常骨组织，高表达mGluR4和GRLF1的骨肉瘤病人的临床预后明显较差，并且GRLF1的表达水平与肿瘤大小、分化程度等临床病理因素相关。我们通过RNA干扰技术对人骨肉瘤细胞MG63中GRLF1的表达敲除后，发现GRLF1的敲除明显抑制了肿瘤细胞增殖并诱导了肿瘤细胞凋亡。另外，我们还进行了相关的循证医学研究，通过meta分析评估了Ezrin、环氧化酶2（COX2）的表达以及谷胱甘肽S-转移酶 (GST) 的基因多态性与骨肉瘤临床病理因素和预后的关联。. 本项目研究结果表明粘着斑通路关键基因的多态性对骨肉瘤遗传易感性和预后的评估具有一定参考价值，并且GRLF1和mGluR4的表达影响了骨肉瘤的增殖和预后。我们的研究成果为预测骨肉瘤的基因易感性和靶向治疗提供了证据。通过本项目的实施，培养了2名硕士研究生，为广西的骨肉瘤基础研究储备了人才。