肠道病毒71型感染性全长cDNA克隆的构建及其神经毒力位点的确认

肠道病毒71型（EV71）是儿童手足口病的重要病原体之一，感染后可导致脑炎等严重的神经系统疾病。近年来，EV71感染导致的死亡病例急剧增多，病毒的毒力变异可能在其中发挥了重要作用。在前期工作中，我们先后自我国不同地区手足口病患者标本中分离到多株EV71病毒，其中AH08/06株接种乳鼠可致典型发病和死亡，而HN08/08株则不具神经毒力。本研究从两株病毒的神经毒力和基因组序列差异入手，运用反向遗传学技术构建感染性全长cDNA克隆；在此基础上，结合序列比对分析及RNA二级结构预测，将一系列突变引入感染性克隆，比较获得的突变病毒的生物学特征，观察其在动物模型中的致病性，从而发现和确认EV71毒力位点，探索EV71毒力变异与致病性的内在联系。上述工作的完成，将能够加深对EV71病毒的认识，为其致病机制的阐明奠定基础。

自2008年国内手足口病爆发以来，EV71病毒是导致爆发和重症的主要病原，但其毒力位点相关致病机制尚未明确。本研究首先构建了EV71病毒AH08/06毒株的全长感染性克隆；对不同毒力EV71病毒基因组进行了序列比对和生物信息学分析；基于此对VP1基因潜在毒力位点进行了预测及突变设计，在全长克隆基础上构建了一系列突变病毒；对突变病毒的体内外特性进行了比较分析，发现一些对病毒毒力及抗体中和能力具有重要作用的氨基酸位点，证实VP1蛋白与EV71病毒毒力具有密切关系。本研究成功建立了EV71病毒的反向遗传学技术平台，深入研究了VP1基因中与病毒毒力及抗体保护相关的位点，发现了一系列关键的氨基酸位点，为EV71病毒的毒力相关致病机制提供了深入的认识。在此基础上，还对手足口病另一重要病原CA16病毒的毒力位点进行了初步研究，通过强弱毒株基因组序列比对发现毒力关键氨基酸位点，并在动物模型初步验证。本课题研究工作为充分了解新发肠道病毒毒力相关致病机制提供了重要资料。