间尼索地平在人重组CYP同工酶体系中的代谢及其对映体对人孕甾烷X受体介导的CYPs转录调节作用比较

M-nisoldipine is an 1,4-dihydropyridine calcium channel antagonist,to be prerented as a couple of enantiomers,which were firstly synthesized in School of Pharmacy,Hebei Medical University.In this study,we investigated the individual contributions of CYPs and UGTs by using recombinant human CYPs and UGTs.M-nisoldipine primary enzymatic reaction kinetics was determined in vitro by human liver microsome to describe the disposition of m-nisoldipine in vivo.The PXR elements expression plasmid and CYPs promoters reporter plasmid co-transfected to Hep2G cell line.Dual-luciferase activity was analyzed after the cells were treated with R,S m-nisoldipine enantiomers respectively to investigate the activate PXR signalling pathway and induce CYPs reporter gene.In addition, RT-PCR was utilized to detect the mRNA experssion of CYPs in Hep2G cells which treated with R,S m-nisoldipine enantiomers respectively. Thus we came to understand the mechanism of how m-nisoldipine affects CYPS, and provided evidence to the study of drug-drug interaction.

间尼索地平为我院首次合成具有自主知识产权的治疗高血压和心绞痛的二氢吡啶类钙通道阻滞剂。分子结构中含有一个手性中心，具有两个对映异构体（R、S）。本研究旨在应用人重组CYPs酶研究CYP450酶各亚型在间尼索地平I相代谢中的作用；同时利用人重组UGT酶研究其各亚型在间尼索地平Ⅱ相代谢中的作用。采用人肝微粒体体外孵育，得到间尼索地平主要代谢反应的酶促反应动力学参数，从而深入探讨间尼索地平体内代谢过程。利用双荧光素酶报告基因技术, 将含有人孕甾烷受体蛋白识别和结合调控元件的CYPs启动子基因的报告基因质粒转染HepG2 细胞,构建PXR报告基因系统，从而比较R，S-间尼索地平地对PXR介导的CYPs表达调节的异同；并以RT-PCR技术检测R,S-间尼索地平对HepG2细胞中CYPs的mRNA表达的影响，从而深入了解间尼索地平对CYPs酶的作用机制，为药物相互作用研究提供科学依据。

间尼索地平（m-nisoldipine）为河北医科大学药学院首创合成的具有自主知识产权的用于治疗高血压和心绞痛的二氢吡啶类钙拮抗剂，分子中含有一个手性中心，具有2个不同的光学异构体(R,S)。本研究采用人肝微粒体体外孵育，得到间尼索地平主要代谢反应的酶促反应动力学参数，从而深入探讨间尼索地平体内代谢过程；应用人重组CYPs酶研究CYP450酶各亚型在间尼索地平I相代谢中的作用；基于高效液相色谱-四级杆-线性离子阱质谱串联技术（HPLC-Q-TRAP/MS），采用CYP450酶亚型选择性抑制剂，研究主要参与间尼索地平对映体在大鼠肝微粒体中代谢转化的CYP450酶亚型，并采用大鼠肝微粒体作为体外代谢反应模型，探讨间尼索地平对映体的体外代谢转化过程；分析间尼索地平在大鼠体内的代谢物，研究间尼索地平及其代谢物在大鼠体内的代谢规律，从而阐明间尼索地平的体内代谢转化途径；以RT-PCR技术检测R,S-间尼索地平对HepG2细胞中CYPs的mRNA表达的影响，从而深入了解间尼索地平对CYPs酶的作用机制，为药物相互作用研究提供科学依据；利用双荧光素酶报告基因技术，将含有人孕甾烷受体蛋白识别和结合调控元件的CYPs启动子基因的报告基因质粒转染HepG2 细胞，构建PXR报告基因系统，从而比较R,S-间尼索地平地对PXR介导的CYPs表达调节的异同。项目资助发表SCI论文3篇、核心论文2篇，待发表SCI论文2篇，中国药学杂志1篇。共培养博士、硕士研究生4名。项目投入经费67万元，各项支出基本与预算相符。