TRAIL-receptor 2 mAb介导的主动靶向纳米微粒的构建及其抗恶性黑素瘤作用研究

恶性黑素瘤(MM)恶性程度高，易血行转移，死亡率高。目前，临床治疗转移性MM仍主要采取术后辅以全身化疗，但化疗药物靶向性差、毒副作用大、且MM细胞对化疗药物不敏感，总体效果不理想。靶向递药系统为其增效减毒带来了希望。MM细胞表面高表达DR5受体，本研究以与DR5具有高亲和性、高特异性、可高效诱导瘤细胞凋亡且对正常细胞无毒副作用的DR5单抗（TRAIL-recreceptor 2 mAb）为靶向功能基，PLA纳米粒为载药系统，达卡巴嗪（DTIC）为模型药物，构建一种新型的主动靶向递药系统（DTIC-Ab-NPs），对其抗MM的效果和对MM细胞的靶向性进行研究，并对DR5单抗与化疗药物联用的协同机制进行初步研究。该主动靶向纳米粒的构建及相关研究国内外尚未见报道，将 DR5单抗以及与化疗药联用于MM的治疗在国内外亦未见相关报道。本课题为转移性MM及其它肿瘤的化疗和靶向免疫治疗提供了新的研究思路。

恶性黑素瘤 (MM)，易血行转移、死亡率高，目前MM的首选化疗药达卡巴嗪（DTIC) 显效率只有20%。有研究发现MM细胞表面高表达DR4或DR5，将DR4或DR5的激动型抗体DR4 或 DR5 mAb用于MM的免疫治疗具有良好的应用前景。.本课题采用对正常细胞无毒副作用、对MM细胞具有高特异性和高选择性，且自身具抗肿瘤活性的的抗DR5单克隆抗体 (DR5 mAb) 为靶头，以DTIC 为模型药物，聚乙二醇修饰的聚乳酸纳米粒 (MPEG-PLA NPs) 为递药系统，制备兼具化疗和免疫治疗作用的主动靶向免疫纳米粒(DTIC-NPs -DR5 mAb)。.第一部分，超声复乳法制备了DTIC纳米粒 (DTIC-NPs)，外形圆整，表面光滑，平均粒径144.2 ± 7.8 nm，Zeta电位-32.1 ± 5.4 mV。XPS光电能谱仪空载纳米粒表面含N元素，说明纳米微粒表面包裹有一层 HSA。.第二部分，采用碳二亚胺法，将DR5 mAb偶联到DTIC-NPs表面，平均粒径166.0 ± 8.1 nm， Zeta电位-36.8 ± 3.2mV。连接在纳米粒表面的DR5 mAb数量为12.8 ± 2.4 μg DR5 mAb/mg NPs，抗体连接效率大约为43%。DTIC-NPs-DR5 mAb具有双重活性功能，即免疫导向和缓释药物。.第三部分，采用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜考察了靶向纳米粒对人MM细胞A375的特异性结合、结合效率和摄取效果。用MTT法考察了靶向纳米粒对A375细胞的抑制增殖作用和促凋亡作用。结果表明，DTIC-NPs -DR5 mAb能跟A375细胞特异性结合，结合效率较高，对A375细胞抑制增殖作用良好，显著强于其它对照组。对正常细胞毒性不大，安全性良好。.第四部分，考察了靶向纳米粒的抗肿瘤效果及体内安全性。裸鼠的血常规及肝肾功能检测结果表明，靶向纳米粒毒性较小，有效减小了DTIC在体内的非特异性毒性。对高表达DR5的MM疗效明确，明显抑制肿瘤的生长。.综上所述，本课题构建了主动靶向纳米给药系统，将化疗和免疫治疗有效结合，从内源性和外源性两条途径促进靶细胞凋亡，起双重和协同治疗作用。本研究可为MM及其他肿瘤的化疗和靶向生物治疗提供相关的研究方法和思路。