自噬在乙肝病毒诱导肝癌中的作用及可能的机理研究

Hepatitis B Virus (HBV) infection is one of the most important causes for hepatocellular carcinoma (HCC). Research has found that HBV infection can raise the level of autophagy both in vivo and in vitro, although the influence of activated autophagy induced by HBV is not clear, but this kind of autophagy level changes can promote HBV replication. Other research has also found that autophagy is a protective mechanism to prevent hepatocellular carcinoma without the background of HBV infection. But it hasn't been studied whether the activated autophagy induced by HBV infection is still a protective mechanism or one of its carcinogenicity. In our previous studies, we have confirmed the relationship between autophagy and HBV replication. And we also found the autophagy level is raised in HCC patients with HBV infection. In this study, we will try to further compare the autophagy level in the carcinoma tissues and the para- carcinoma tissues from the HCC patients with or without HBV infection, the different serum HBV copies will also been taken into consideration to make sure the change of autophagy in HCC patients with HBV infection. At the same time we will further explore the influence of activated autophagy induced by HBV in HCC cells in vitro, and validate in the carcinoma tissues from the HCC patients.

HBV感染是肝癌发生的重要诱因之一。已有研究发现HBV感染也可以上调细胞自噬的水平，但是HBV诱导激活的自噬对细胞本身的影响尚不明确，这种自噬水平的变化可以促进HBV的复制。同时其他的研究发现，在无HBV感染的情况下，自噬是抑制肝细胞肝癌发生的一种保护性机制。但对于HBV感染的肝癌来说，HBV所上调的自噬对肝细胞肝癌的发生有何影响尚不明确。在我们的前期试验中，已经证实自噬与肝病毒复制之间有着密切的关系，并发现HBV感染的HCC患者组织中自噬水平增加。本研究通过进一步比较HBV感染和非感染的HCC患者癌和癌旁组织标本中自噬水平的变化，并与感染者血清中HBV复制水平相对应，明确HBV感染的HCC患者肿瘤样本中自噬水平的变化。同时在细胞水平进一步探讨HBV感染诱导激活的自噬现象在HCC发生中可能的机制，并将上述体外实验中的发现在肿瘤患者样本中进行重复验证。

我国是肝癌大国，乙肝病毒（HBV）是引发肝癌的一项重要因素，探索HBV与肝癌发生的关系是一项重要的工作。有研究发现， HBV复制与自噬现象有紧密的联系，而促进自噬可以明显的增加HBV复制。我们首次明确了HBV背景的肝癌患者的癌组织中自噬水平高于HBV阴性的患者。为了进一步研究自噬在HBV诱导肝癌中的作用机制，我们构建了两种分泌HBV的肝癌细胞系。通过饥饿刺激自噬和3-MA抑制自噬，观察细胞系的增殖，凋亡和病毒复制的变化。结果发现促进自噬可以明显增加HBV复制数量，与HBV复制相关的乙肝病毒聚合酶，乙肝核心抗原和乙肝表面抗原表达量均有所增加。在抑制自噬时，HBV复制相关蛋白表达减少，但是病毒数量未能减少。当自噬被抑制时，HBV阳性的细胞系细胞增殖水平高于HBV阴性细胞系，而在刺激自噬时，不同HBV背景的细胞系增殖均减少，减少程度没有差异。我们还观察到在HBV阳性的细胞系中，刺激自噬后，细胞凋亡数增加，而抑制自噬后细胞凋亡减少。同时还观察到刺激自噬可以明显抑制Bcl-2的表达量并增加Beclin-1的表达量，而在使用3-MA抑制自噬后，观察到的正好相反。在HBV阴性的细胞系中，刺激和抑制自噬对Bcl-2的表达水平没有明显作用，而Beclin-1的变化趋势与HBV阳性细胞一致。由此推测，HBV背景下，自噬所引起的细胞增殖和凋亡的改变与Bcl-2蛋白相关。为了在临床上验证这一发现，我们在LC3蛋白表达较高的HBV阳性肝癌患者癌组织中观察Bcl-2和Beclin-1蛋白及mRNA表达情况，并与HBV阴性的肝癌患者组织中的表达情况进行比较。结果发现，HBV阳性患者Bcl-2蛋白和mRNA表达水平低于HBV阴性患者，Beclin-1表达水平没有明显差异，与细胞体外实验结果一致。相关的研究成果在国内和国际会议上进行汇报，获得同行肯定。在研究实施过程中，发表了6篇SCI文章，还有2篇英文文章正在投稿过程中。本研究结果将为寻找HBV阳性的肝癌患者治疗新方法提供新的可能。