糖肾方上调PLZF表达减轻糖尿病肾纤维化的机制研究

Renin-angiotensin system (RAS) is a key effector in the pathogenesis of diabetic renal fibrosis. It has been recently reported the binding of (pro)renin and (pro)renin receptor (PRR) can enhance RAS activity, and PLZF is a novel key regulatory protein of PRR. However, the role of PLZF in diabetic nephropathy (DN) remains to be clarified. In our previous study of gene-expression microassay, the decreased expression of PLZF was detected in kidney of db/db mouse model, which could be significantly reversed by traditional Chinese medicine Tangshen Formula (TSF). Therefore, we make the hypothesis that Tangshen formula could up-regulate the expression of PLZF to improve DN renal fibrosis. The experimental methods of real-time PCR, Western blot and electrophoretic mobility shift assay (EMSA) will be used to clarify the mechanism of PLZF in DN renal fibrosis. This study will elucidate the relationships between PLZF expression, PLZF/PRR cascade, RAS activity and diabetic renal fibrosis using plasmid transfection with RNA interference technology in vivo and in vitro. Furthermore, the sensitive zone of PLZF promoter regulated by TSF will be identified by dual-luciferase reporter assay system. Therefore, we will validate the hypothesis that TSF would improve renal fibrosis through up-regulating the expression of PLZF. The study will further clarify the pathogenesis of DN and the biological mechanism of TSF on improvement of DN.

肾素-血管紧张素系统（RAS）在糖尿病肾纤维化中具有重要作用。最新研究发现，前肾素或肾素与其受体（PRR）结合是RAS活化的新途径, PLZF是PRR的重要调控蛋白，但PLZF在糖尿病肾病（DN）中的作用尚无相关报道。本课题组前期基因表达谱芯片发现，DN模型小鼠肾脏中PLZF表达水平明显下降，中药糖肾方可显著上调PLZF的表达。因此，我们认为糖肾方可上调PLZF表达改善糖尿病肾纤维化。本课题拟结合体内、体外实验，采用质粒转染、RNA干扰等技术，基于定量 PCR、Western blot及凝胶迁移率实验等方法，分析PLZF/PRR级联、RAS活性、肾脏纤维化等标志分子的变化，阐明糖肾方上调PLZF表达减轻DN肾纤维化的机制；利用双荧光素酶报告基因系统，明确糖肾方调控PLZF基因转录的启动子靶区域。本研究对于DN发生机制的阐述和糖肾方治疗DN的机制研究及其科学内涵具有重要意义。

肾素-血管紧张素系统是导致糖尿病肾纤维化的重要机制。研究发现，肾素与（前）肾素受体（PRR）结合是肾素-血管紧张素系统活化的新途径, PLZF 是 PRR 的重要调控蛋白，且与细胞自噬密切相关，但 PLZF 在糖尿病肾病（DN）中的作用尚不明确。中药复方糖肾方可以显著降低糖尿病肾病患者的蛋白尿和估算肾小球率过滤，但是其机制尚不清楚。因此，本研究旨在探索糖肾方治疗糖尿病肾损伤的分子靶点及其潜在的分子机制。本研究拟利用定量PCR、Western blot、细胞转染及透射电镜等技术，通过体内外实验分析PLZF/PRR级联、细胞自噬及肾纤维化标志分子改变与DN 病变的关系，揭示糖肾方调控PLZF减轻糖尿病肾纤维化的分子机制。课题组前期基因表达谱芯片研究发现，PLZF可能是糖肾方改善DN的分子靶点。体内实验发现，db/db模型小鼠肾脏中PLZF/PRR级联、纤维化蛋白表达显著升高，自噬水平下降（LC3 II表达下调，p62/SQSTM1表达上调）。糖肾方可以逆转模型小鼠肾脏中上述蛋白的表达水平改变，激活细胞自噬。体外实验表明，糖肾方可抑制高糖诱导肾小管上皮细胞增殖；高糖或（前）肾素可导致细胞自噬水平下降，PLZF/PRR级联和collagen III等纤维化蛋白表达升高，而糖肾方可通过下调高糖或（前）肾素诱导的PLZF/PRR级联的表达，激活细胞自噬，减少纤维化蛋白的积聚。总之，糖肾方可能通过调控PLZF表达、PLZF/PRR级联，诱导细胞自噬，进而促进了纤维化蛋白的自噬性降解，延缓了糖尿病肾纤维化进展。本研究推动了DN 药物新靶标的发现及中药复方治疗DN生物学内涵的阐释。