角质化细胞生长因子相关microRNA在ALI/ARDS病程中作用机制的研究

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是临床常见综合征，可伴发于多种疾病，具有发病率、病死率高等特点。角质化细胞生长因子（KGF）同γδT细胞密切相关，能够促进在肺泡上皮细胞（AECs）修复，改善急性、慢性病程中的炎症反应，，维持正常组织修复，防止组织脏器纤维化，预防ARDS病变进展。但是，目前在蛋白水平进行干预存在很大局限性，无法充分阐述作用机制。近年来，对microRNA（mir）的研究是国内外热点，microRNA能够降解靶mRNA或抑制靶mRNA的翻译，从而沉默特定基因发挥生物学效应。本课题拟研究筛选出在肺脏高表达而且靶基因含KGF、KGFR的microRNA，通过构建重组腺病毒载体及antagomir，在microRNA水平调控KGF/KGFR表达，进而干预ARDS病程，以期为深入阐明ARDS发病机制，最终为临床治疗ARDS提供可行的实验数据，为进一步的深入研究提供新思路和理论依据。

为了明确角质化细胞生长因子（KGF）相关microRNA在ALI/ARDS病程中发挥怎样的作用，本项目复制ALI/ARDS动物模型，并提前经气道滴注KGF（5mg/kg）进行干预。通过进行肺组织湿干比、病理学、microRNA及mRNA芯片检测，得到如下结果：（1）KGF能够改善ALI/ARDS模型动物的肺湿干比和肺泡出血及炎细胞浸润；（2）模型组与KGF干预组大鼠肺组织microRNA芯片检测未提示有表达明显差异的目标microRNA，可能提示我们KGF对于ARDS病程的作用并不发生在转录前这一阶段；（3）通过结合mRNA芯片结果进行生物信息学分析发现KGF在正向调节肿瘤坏死因子生物合成、炎症反应、antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class II、负向调控白血球迁移、细胞应答细菌分子、正向调控细胞因子的产生、负向调控白细胞凋亡、正向调节应答外部刺激、肌原纤维的组装、正向调节T细胞活化等生物过程中发挥作用。（4）因microRNA在生物机制上一般抑制基因的表达，因此相应地整合Gene和microRNA表达谱数据筛选负相关关系，与MiRanda3和TargetScans4收集预测的microRNA-target关系取重叠的部分，这样就结合表达谱数据获得了高可信度的microRNA-target调控关系。通过microRNA与mRNA联合的生物信息学分析，发现有些microRNA的targets功能与细胞增殖、细胞凋亡等有关，有些microRNA与免疫、炎症反应、细胞通透性相关。