极端耐盐菌调渗基因的分离与鉴定

提取极端耐盐菌盐单胞菌C6的总DNA，用Sau3A进行部分酶切，回收15-30Kb的DNA片段，以pLAFR3为载体在大肠肝菌DH5α中构建了该菌的基因文库。以费氏中华根瘤菌盐敏感突变株RC3-3为受体，在辅助质粒pPK2013的协助下进行三亲本杂交，在含有盐和抗生素的基本培养基上筛选耐盐的阳性克隆，分离到与耐盐有关的DNA片段。对该片段进行两次亚克隆，得到3.2Kb的DNA片段。经过检测，该片段能使RC3-3恢复耐盐性。通过测序。并进行同源性序列比较和开放阅读框架分析，发现该片段为转座子的一部分，由转座酶基因和插入序列IS903组成。其上游含有类似于大肠杆菌proU和proP基因的启动区和类似于枯草芽胞杆菌δβ因子识别的启动区。上述结果表明该转座子参与盐单胞菌C6的渗透调节作用。