Epac-1/Rap1在PGE2致宫颈癌DC迁移障碍中的作用及机制研究

Cervical cancer is an important gynecological malignancy threat to women's health in the world. It is reported that dendritic cells fail to migrate from cervical neoplasia lesions to draining lymphnodes, and this failure plays a key role in immune evasion of carcinoma. Based on references and our preliminary results, we make a hypothesis that over synthetized and released PGE2 from cancer cells act on dendritic cells and down-regulate their migration though "EP2 receptor/Epac-1/Rap1" pathway. This project based on our previous research and aim to investigate the state of Epac-1/Rap1 signals and actin filament and focal adhesions in PGE2/EP-2 regulated dendritic cells. Utilizing the in vitro model of cultured bone maarow derived dendritic cell and DC 2.4 cells, we will research the effect of PGE2 on activation of Epac-1/Rap1 signal, reorganization of actin filament and focal adhesions,and clarify the subtype characteristic of Rap1. At last, using a model combined tumor-burdened mice with in vivo imaging system, we will try to validate our hypothesis that " PGE2/EP-2→Epac-1/Rap1→DC migration failure".

宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤。研究表明，机体抗肿瘤免疫的重要环节－树突状细胞(DC)自宫颈癌变组织向淋巴结迁移受阻，构成肿瘤免疫逃逸的重要因素，但机制不清。综合文献和预研结果，我们提出"病变组织合成PGE2上调，通过DC胞膜EP-2受体激活胞内Epac-1/Rap1信号，影响微丝骨架、粘连结构有序重组，破坏细胞运动的内在动力，从而下调DC迁移"的科学假设。本项目拟在预研基础上,应用基因工程、免疫印迹、RT-PCR和pull-dow等技术，探明PGE2/EP-2作用下DC胞内Epac-1、Rap1不同亚型的表达及激活特点，探讨Epac-1/Rap1信号调节DC迁移的亚细胞机制，明确PGE2/EP-2调控下的主要Rap1作用亚型；并通过动物荷瘤、在体成像和流式检测等技术，验证"PGE2/EP-2→Epac-1/Rap1→DC迁移受阻"的假设。进一步阐明宫颈癌DC迁移障碍的分子机制。

宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤。研究表明，机体抗肿瘤免疫的重要环节－树突状细胞(DC)自宫颈癌变组织向淋巴结迁移受阻，构成肿瘤免疫逃逸的重要因素，但机制不清。本项目应用基因工程、免疫印迹、RT-PCR 和pull-down 等技术，探明PGE2/EP2 作用下DC 胞内Epac1、Rap1 不同亚型的表达及激活特点，探讨Epac1/Rap1 信号调节DC 迁移的亚细胞机制，明确PGE2/EP2 调控下的主要Rap1 作用亚型；并通过动物荷瘤、在体成像和流式检测等技术，验证“PGE2/EP2→Epac1/Rap1→DC 迁移受阻”的假设。通过实验发现，PGE2对DC迁移能力的调控是一个双向调节机制，即高浓度PGE2抑制DC迁移，而低浓度PGE2促进DC迁移。同时，PGE2的效应是通过重组细胞的F-actin骨架结构来实现的。更为重要的是，高浓度PGE2抑制DC迁移的效应是通过EP2/Epac1/Rap1信号转导通路发挥作用的。本研究进一步阐明了宫颈恶性病变免疫逃逸的发生机制，同时为逆转DC 迁移障碍、重建免疫监视提供了新的干预靶点。同时，由于PGE2 的过度合成、释放与DC 的功能缺失存在于除宫颈癌之外的多种恶性肿瘤，因此，本研究的成果对其它类型肿瘤的免疫逃逸机制研究亦存在借鉴意义。